ICS65.020.20 CCSB30DB36 江西省地方标准 DB36/T1869—2023 香菇菌种生产技术规程 TechnicalregulationforspawnproductionofLentinulaedodes 2023-11-08发布 2024-05-01实施 江西省市场监督管理局发布 DB36/T1869—2023 I目  次 前言.................................................................................II 1范围...............................................................................1 2规范性引用文件.....................................................................1 3术语和定义.........................................................................1 4菌种生产要求.......................................................................2 5母种生产...........................................................................3 6原种、栽培种生产...................................................................5 7贮存与菌种生产档案.................................................................9 DB36/T1869—2023 II前  言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江西省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：江西省农业科学院农业应用微生物研究所。 本文件主要起草人：王赟萍、张诚、马吉平、钟国祥、王素贞、肖银润、熊小文，李伟红。 DB36/T1869—2023 1香菇菌种生产技术规程 1范围 本文件规定了香菇（Lentinulaedodes）菌种的术语和定义、菌种生产要求、母种生产、原种与栽 培种生产、贮存与菌种生产档案等内容。 本文件适用于江西省区域香菇母种、原种和栽培种菌种生产要求。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB9688食品包装用聚丙烯成型品卫生标准 GB19170香菇菌种 GH/T1013香菇 NY/T528食用菌菌种生产技术规程 NY/T1284食用菌菌种中杂菌及害虫的检验 NY/T1731食用菌菌种良好作业规范 NY/T1742食用菌菌种通用技术要求 NY/T1935食用菌栽培基质质量安全要求 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 香菇Lentinulaedodes 香菇又名香孽、香信、香苑、冬菇、椎茸(日本)。属担子菌门（Basidiomycota）、伞菌亚门 （Agaricomycotina）、伞菌纲（Agaricomycetes）、伞菌目（Aganicales）、光茸菌科(Omphalotaceae)、 小香菇属（Lentinula）的一类木腐菌，子实体肉质或近肉质。 [来源：GH/T1013-2015，3.1，有改动] 3.2 菌种spawn 通过生产试验具有特异性、均一性和稳定性，且丰产性好、抗逆性强，生长在适宜基质上的培养物， 包括母种、原种和栽培种。 3.3 母种stockculture DB36/T1869—2023 2经分离、杂交、诱变等各种方法选育得到的具有结实性的香菇菌丝体纯培养物及其继代培养物，以 玻璃试管为培养容器和使用单位，也称为一级种、试管种。 [来源：GB19170-2003，3.1，有改动] 3.4 原种motherspawn 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以玻璃菌种瓶或塑料菌种瓶或（12～17）cm×（22～ 28）cm×（0.004～0.005）cm聚丙烯塑料袋为容器，也称为二级种。 3.5 栽培种plantingspawn 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以菌种瓶（玻璃瓶或塑料瓶）或（15～17）cm× （33～35）cm×（0.004～0.005）cm聚丙烯塑料袋为容器。栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌 种，也称为三级种。 3.6 固体菌种solidspawn 以富含木质素、纤维素和淀粉等天然有机物为主要原料，添加适量的有机氮源和无机盐类，具一定 水分含量的固体培养基培养的纯菌丝体。 3.7 液体菌种liquidspawn 指采用与母种营养成份相似但不添加琼脂的液体培养基培养而得到的纯菌丝体，菌丝体在培养基中 呈絮状或球状，液体菌种可以作为原种或栽培种使用。 4菌种生产要求 4.1人员要求 香菇菌种生产所需要的技术人员和检验人员应经过专业培训、掌握香菇基础知识及香菇菌种生产技 术规程要求。 4.2场所和厂房要求 香菇菌种生产应选择地势高、通风良好、空气清新、水源近、排水通畅和交通便利的场所。周边无 污染源。 香菇菌种生产厂房要求有各自隔离的摊晒场、原材料库和配料分装库。配套有配料室、搅拌室、装 袋（瓶）室、灭菌室、冷却室、接种室、培养室（通风好，有纱窗）、菌种检测室及菌种冷藏库等各环 节的设施。冷却室、接种室和培养室都应要有净化设施和无菌设施。 4.3生产设备要求 DB36/T1869—2023 3香菇菌种生产需要电子秤、搅拌机、装袋（瓶）机、高压灭菌锅或常压灭菌锅、臭氧离子发生器、 超净工作台或接种箱、恒温培养箱、培养架、摇床、菌种发酵罐、冰箱、空调、显微镜等设备。 5母种生产 5.1生产流程 培养基配制→分装试管→灭菌→冷却→无菌检验→接种→培养→检验→母种。 5.2容器 试管一般选用18mm×180mm或者20mm×200mm。 5.3培养基 培养基配方如下： 配方一：PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，加水至 1000mL。如果配方中的葡萄糖替换成蔗糖，称为PSA培养基。 配方二：CPDA培养基(综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基)：马铃薯200g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾2g， 硫酸镁0.5g，琼脂20g，加水至1000mL。 5.4分装 分装培养基至试管1/4～1/3处，用棉塞或硅胶塞封闭试管口，每5支试管为1捆，牛皮纸或报纸包棉 塞，棉线扎紧，棉塞向上放置。棉塞应采用梳棉，不能使用脱脂棉。 5.5灭菌 放入高压灭菌锅灭菌，在121℃～124℃（0.11MPa～0.12MPa）下灭菌25min。 5.6冷却 灭菌后温度降到55℃～65℃时，在空气清洁的室内摆斜面，要求斜面长度不超过试管长度的2/3。 5.7无菌检验 抽取3%～5%冷却的试管，在28℃下培养48h，无微生物长出为灭菌合格。 5.8母种制备 5.8.1超净工作台消毒 先用75%酒精棉球将超净工作台以及接种工具表面擦拭消毒，再打开紫外灯照射30min。 5.8.2香菇菌种分离 挑选生长长势良好、形状规则、未开伞、无虫蛀的香菇子实体作为种菇，用75%的酒精棉球对种菇 表面擦洗消毒，并用无菌滤纸充分吸干后放置在洁净的培养皿中。用双手将菇体掰开，用无菌接种刀， 在菌盖与菌柄交界处切取10mm×5mm“目”字形组织小块为接种材料。用接种针挑取一小块组织片， 迅速地接入试管斜面培养基的中央，然后将试管口和棉塞在酒精灯火焰上过火灭菌后塞好，将接种后的 试管放入25℃的恒温箱内培养，2d～3d后组织块及周围便长出白色的菌丝，待菌丝长满试管斜面即可。 DB36/T1869—2023 45.8.3转管培养 选取斜面上菌丝茁壮、长势优良的试管，用接种工具挑取（3～5）mm×(3～5)mm的菌块，按无菌 操作要求，转接到新的试管培养基中，置于25℃的培养箱中培养15d～20d，当菌丝长满培养基表面， 即成母种，可用于生产原种。 5.8.4菌种检查 接种48h后应做首次检查，挑拣出未萌发或污染母种。母种菌落长至直径2cm左右时，进行第二次 检查，待菌丝长满培养基前再检查一次，剔除或丢弃污染、生长不良的菌种。 5.8.5母种检查要求 母种形态要求见表1。 表1香菇母种形态要求 项目 要求 检验方法 容器 完整、无破损、无裂纹、洁净 肉眼观察 棉塞或硅胶塞 干燥、整洁、松紧适度 肉眼观察 菌丝生长量 长满培养基 肉眼观察 菌丝体特征 洁白、平整、无角变 肉眼观察 菌落边缘 整齐 肉眼观察 菌丝体分泌物 无 肉眼观察 杂菌菌落 无 肉眼观察，必要时使用5×放大镜观察 斜面背面外观 培养基不干缩，颜色均匀，无暗斑、无色素 肉眼观察 6原种与栽培种生产 6.1生产技术流程 培养基配制→装袋（瓶）→灭菌→冷却→接种→培养→检查→原种（栽培种）。 6.2固体菌种生产 6.2.1培养基配方 培养基配方如下： a）配方一：杂木屑78%、麦麸20%、石膏粉1%、白糖或红糖1%； b）配方二：杂木屑78%、麦麸18%、玉米粉2%、石膏1%、白糖或红糖1%