(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210987549.9 (22)申请日 2022.08.17 (71)申请人 南京中医药大学 地址 210023 江苏省南京市栖霞区仙林大 道138号 申请人 南京笑语生物科技有限公司 (72)发明人 王晶晶　宋立铨　金喆彤　 (74)专利代理 机构 江苏致邦律师事务所 32 230 专利代理师 邵林　徐蓓 (51)Int.Cl. A61K 47/69(2017.01) A61K 39/39(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种多肽类纳米疫苗及其制备方法与应用 (57)摘要 本发明提供了一种多肽类纳米疫苗及其制 备方法， 多肽类纳米疫苗包括载体和负载于所述 载体上的佐剂， 所述载体为β ‑环糊精修饰的聚 乙烯亚胺和抗原肽通过交联剂交联得到的纳米 颗粒， 所述交联剂为还原响应型交联剂。 该多肽 类纳米疫苗可 实现抗原肽和佐剂 共同递送， 可在 淋巴结高效富集， 并且可以在细胞内还原性条件 下裂解释放出多肽抗原， 能充分刺激抗原呈递细 胞、 增强抗原的交叉呈递， 提高免疫应答。 该多肽 类纳米疫苗原料价格低易获得， 制备方法简单， 对所有肽类抗原均通用， 有良好的应用前 景。 权利要求书1页 说明书7页 附图5页 CN 115414494 A 2022.12.02 CN 115414494 A 1.一种多肽类纳米疫苗， 其特 征在于， 包括载体和负载于所述载体上的佐剂， 所述载体为β ‑环糊精修饰的聚乙烯亚胺和抗原肽通过交联剂交联得到的纳米颗粒， 所 述交联剂为还原响应型交联剂； 优选的， 所述载体的粒径为3 0~1000 nm。 2.根据权利要求1所述的多肽类纳米疫苗， 其特征在于， 所述佐剂包裹于β ‑环糊精的空 腔中， 或者 通过静电作用负载于所述载体上。 3.根据权利要求2所述的多肽类纳米疫苗， 其特征在于， 所述佐剂为疏水型佐剂 或离子 型佐剂， 所述疏水型佐剂包裹于所述β ‑环糊精的空腔 中， 所述离子型佐剂通过静电作用负 载于所述载体上。 4.根据权利要求3所述的多肽类纳米疫苗， 其特征在于， 所述疏水型佐剂为瑞喹莫德或 咪喹莫特。 5.根据权利要求3所述的多肽类纳米疫苗， 其特征在于， 所述离子型佐剂为寡脱氧核苷 酸或聚肌苷酸胞苷酸。 6.根据权利要求1所述的多肽类纳米疫苗， 其特征在于， 所述还原响应型交联剂的结构 式为： 。 7.根据权利要求1所述的多肽类纳米疫苗， 其特征在于， 所述抗原肽为抗原卵清蛋白 OVA抗原肽SIINFE KL、 靶向CT2 6的抗原肽QAIVRGCSMPGPWRSGRLLVSRRWSVE、 靶向B16 F10M27的 抗原肽LCPGNKYEM、 靶向MC38的抗原肽ASMTNMELM、 靶向肝癌细胞HHCC的抗原肽SLIVHLNEV、 靶向黑色素瘤的HLA ‑A2限制性抗原肽YLEPGPVTA、 抗原肽ELAGIGILTV、 抗原肽FVGE FFTDV、 破 伤风类毒素肽AQYIKANSK FIGITEL或模型肽F FQNK。 8.权利要求1 ‑7任一所述多肽类纳米疫苗的制备 方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： （1） 将β‑环糊精修饰的聚乙烯亚胺、 还原响应型交联剂和抗原肽于二甲亚砜中交联反 应， 得到所述载体； （2） 将所述佐剂和所述载体在溶 液中共孵 育， 即得所述多肽类纳米疫苗。 9.根据权利要求8所述的制备方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中所述β ‑环糊精修饰的聚乙 烯亚胺由如下 方法制得： （1‑1‑1） 向β‑环糊精的NaOH溶 液中加入 对甲苯磺酰氯， 搅拌 反应得到产物β ‑CD‑OTs； （1‑1‑2） 将β‑CD‑OTs与聚乙烯亚胺于二甲亚砜中搅拌反应， 得到β ‑环糊精修饰 的聚乙 烯亚胺。 10.权利要求1 ‑7任一所述多肽类纳米疫苗在制备抗肿瘤疫苗中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115414494 A 2一种多肽类纳米疫苗及其制备方 法与应用 技术领域 [0001]本发明涉及 生物免疫技术领域， 尤其涉及 一种多肽类纳 米疫苗及其制备方法和应 用。 背景技术 [0002]疫苗对保障人类健康， 改善生活质量和促进社会发展做出了巨大的贡献。 [0003]疫苗一般分为两类： 预防性疫苗和治疗性疫苗。 熟知的预防性疫苗主要用于疾病 的预防， 接收者为健康个体或新生儿， 例如百白破疫苗、 新型冠状病毒肺炎疫苗等； 治疗性 疫苗主要用于患病的个体， 接受者为患者， 是在已感染病原微生物或已患有某些疾病的机 体中， 通过诱导特异 性的免疫应答， 达到治疗或防止疾病恶化的天然、 人工合成或用基因重 组技术表达的产品或制品， 例如 治疗性乙肝疫苗、 治疗性胰腺癌疫苗等， 属于特异 性主动免 疫疗法。 目前， 治疗性疫苗主 要包括亚单位疫苗、 免疫复合物型疫苗、 多肽类疫苗 等。 [0004]近年来， 全球恶性肿瘤的发病率及死亡率， 每年保持约3.9％和2.5％的增幅， 且恶 性肿瘤死亡占居民全部死因的23.91％， 寻求有效提高癌症患者生存率， 改善患者生存质量 的治疗方式已成为一大研究难点。 此时， 以免疫学为基础的肿瘤 免疫疗法在癌症治疗领域 展现出了极大优势。 肿瘤 免疫疗法是利用机体免疫系统特异性杀伤肿瘤细胞 的治疗方法， 该方法可以抑制肿瘤生长并使机体产生免疫记忆， 可有效抑制恶性肿瘤的增殖、 转移和复 发， 目前主 要包括单 克隆抗体治疗、 过继细胞疗法和肿瘤疫苗 等。 [0005]肿瘤疫苗可以利用DNA、 RNA、 蛋白质或肽等肿瘤相关抗原 （TAA） 去调节免疫系统。 在疫苗进入人体后， 抗原会被存在于外周的巨噬细胞或树突状细胞 （DCs） 等抗原呈递细胞 （APCs） 表面的模式识别受体 （PRRs） 识别， 将其转运至引流淋巴结或脾脏等免疫器官。 由于 抗原的不同， 有的直接被B细胞识别， 有的呈递给免疫器官中的T细胞， 产生针对不同肿瘤抗 原的特异性T细胞， 也能重新激活休眠和失能的T细胞， 从而激发新的或促进已有的抗肿瘤 免疫反应， 实现诱导并增强肿瘤特异 性T细胞对癌症的应答。 且这种免疫不同于免疫检查点 阻断诱导的广泛免疫， 肿瘤疫苗可以实现对肿瘤的精确免疫。 近年来宫颈癌、 前列腺癌等相 关肿瘤疫苗 也已有上市产品。 [0006]利用肿瘤表面特异性抗原多肽制备的多肽疫苗， 提供了靶向特定表位的最直接方 式， 多肽疫苗含有的特定多肽表 位由T细胞 受体识别， 可以刺激产生肿瘤特异 性T细胞， 精 准 杀伤肿瘤， 减轻自身的不良炎症反应。 [0007]随着癌症共享抗原和突变源抗原的鉴定， 预计多肽癌症疫苗的应用范围将 大为扩 展， 有很大的造福患者的潜力。 且基于抗原多肽的癌症疫苗安全性高、 易于制造， 且它们可 以直接监测T细胞对抗原肽的CD4+和CD 8+T细胞反应， 这 一点在疫苗 开发中非常 关键。 [0008]但目前基于多肽的肿瘤疫苗大多存在以下几个问题： 第一抗原肽容易在递送中途 被降解； 第二难以共递送免疫佐剂， 而在没有免疫佐剂的情况下， 未成熟的抗原呈递细胞与 抗原接触后触发免疫反应的几率较低。 第三， 多肽类疫苗的抗原肽序列多样， 理化性质各 异， 现有的载体难以适用于所有的肽类抗原。说　明　书 1/7 页 3 CN 115414494 A 3