(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211281535.1 (22)申请日 2022.10.19 (71)申请人 劲牌有限公司 地址 435000 湖北省黄石市大冶市大冶大 道169号 (72)发明人 陈琪瑶　赖富丽　崔灵敏　周俊强　 唐万　李韦琴　左刚　徐剑　 杨跃军　王喆　 (74)专利代理 机构 北京文苑专利代理有限公司 11516 专利代理师 陈佳 (51)Int.Cl. A61K 36/8962(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 131/00(2006.01) (54)发明名称 一种抑制6-磷酸葡萄糖脱氢酶的韭菜子提 取物的制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种抑制6 ‑磷酸葡萄糖脱氢 酶(G6PD)的韭菜子提取物的制备方法及其应用， 本发明从韭菜子中提取、 纯化得到韭菜子提取 物， 并采用基于6 ‑磷酸葡萄糖脱氢酶抑制的抗肿 瘤天然产物体外筛选模型对其活性进行评价， 结 果显示， 本发明制备的韭菜子提取物对G6PD具有 显著的抑制作用， 为韭菜子提取物作为抗肿瘤药 物用途及其作用机制提供了方法。 权利要求书1页 说明书4页 CN 115487263 A 2022.12.20 CN 115487263 A 1.一种抑制6 ‑磷酸葡萄糖脱氢酶的韭菜子提取物的制备方法， 其特征在于， 包括如下 步骤： (1)药材提取： 将粉碎后的韭菜子、 或盐韭菜子用8～12倍量10％～40％乙醇溶液浸泡1 ～2h， 随后在40 0‑500W条件下， 超声提取1～ 2次， 每次3 0～60min， 过滤， 收集滤 液得提取液； (2)浓缩干燥： 将上述过滤后的提取液在40～60℃温度下减压浓缩干燥， 得韭菜子粗提 物JCZ‑E； (3)纯化制备： 取上述韭菜子粗提物 JCZ‑E加入10倍量超纯水分散， 依次用石油醚、 乙酸 乙酯、 正丁醇进行萃取， 萃取所得水层部位用大孔 吸附树脂吸附4h， 然后依次用3倍柱体积 的不同浓度的乙醇梯度洗脱， 分别收集洗脱液； (4)浓缩干燥： 将上述收集的洗脱液分别在40～60℃下减压浓缩干燥即得韭菜子不同 洗脱部位的提取物； 定量称取不同洗脱部位提取物， 加浓度为0～10％二甲基亚砜(D MSO)复 溶于35％乙醇中， 4℃保存。 2.根据权利要求1所述的一种抑制6 ‑磷酸葡萄糖脱氢酶的韭菜子提取物的制备方法， 其特征在于， 步骤(4)中分别采用15％、 35％、 55％、 75％的乙醇进行梯度洗脱， 得到对应的 洗脱液。 3.根据权利要求1所述的一种抑制6 ‑磷酸葡萄糖脱氢酶的韭菜子提取物的制备方法， 其特征在于， 步骤(4)中分别采用3 5％、 55％的乙醇进行洗脱， 得到对应的洗脱液。 4.权利要求1 ‑3任一项所述的制备方法制备得到的韭菜子提取物在制备抗肿瘤药物中 的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115487263 A 2一种抑制6 ‑磷酸葡萄糖脱 氢酶的韭菜子提取物的制备方 法 技术领域 [0001]本发明涉及中药提取技术领域， 具体涉及一种抑制6 ‑磷酸葡萄糖脱氢酶的抗肿瘤 中药提取物及其应用， 该中药提取物从韭菜子中提取、 纯化 获得， 具有抑制6 ‑磷酸葡萄糖脱 氢酶活性， 可应用于抗肿瘤药物的开发。 背景技术 [0002]6‑磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)是磷酸戊糖(PPP)途径过程中的关键酶， 该途径所生 产的5‑磷酸核糖和 还原型辅酶 Ⅱ(NADPH)是生命物质的合成原料。 5 ‑磷酸核糖是细胞增殖 分化的重要生物原料。 NADPH作为供氢体(还原剂)可参与体内多种代谢反应， 如脂类、 脂肪 酸和核苷酸的合成， 药物、 毒 素、 某些激素等生物 转化， NADP H还是细胞内氧化还原稳态的关 键调节因子。 G6PD 的活性能够直接反映氧化分支的通量， 决定糖酵解与PPP之间的通量分 配。 高G6PD活性有望增加细胞分裂和增殖所需的脂类和DNA的生物 合成。 而快速增殖的细胞 或癌细胞通常通过激活G6PD来增加PPP通量， 最 终达到满足增殖过程中的生物能量的需求。 大量研究表明， G6PD基因在很多肿瘤细胞中过表达， 造成肿瘤快速增殖。 恶性肿瘤是三大致 死疾病之一， 严重危害居民健康。 因此， 寻找有效且副作用小的G6PD抑制剂， 为开发抗癌新 药奠定基础。 [0003]韭菜子为百合科植物韭菜Allium  tuberosum  RottL.ex  Spreng.的干燥成熟种 子。 秋季果实成熟时采收果序， 晒干， 搓出种子， 除去杂质。 中医认为， 韭菜子辛、 甘， 温。 归 肝、 肾经。 具有温补肝肾， 壮阳固精。 用于肝肾亏虚， 腰膝酸痛， 阳痿遗精， 遗尿尿频， 白浊带 下的功能。 现代研究表明， 韭菜子主要含有生物碱、 挥发油、 皂苷及蛋白质、 氨基酸、 油脂类 成分以及腺苷、 尿苷等核苷类成分， 具有增强免疫、 抗氧化、 抗衰老、 治疗牙痛等作用。 虽然 有研究表明不同浓度韭菜子总皂苷水解产 物对Hela细胞均有细胞毒性， 但并未见有文 献报 道韭菜子中有成分通过抑制G6PD活性 发挥抗肿瘤作用。 亦有专利涉及6 ‑磷酸葡萄糖脱 氢酶 抑制剂通过改善抑制性肿瘤免疫微环境增强PD ‑L1单克隆抗体抗肿瘤效果的应用， 例如中 国发明专利申请202111201846.8公开了一种6 ‑磷酸葡萄糖脱氢酶抑制剂的医药用途， 该专 利中6‑磷酸葡萄糖脱氢酶抑制剂为一种 放疗增敏剂使用， 用于提高提高PD ‑L1单抗治疗效 果， 所述6 ‑磷酸葡萄糖脱氢酶抑制剂选自去氢表雄酮(DHEA)、 6 ‑氨基烟酰胺(6 ‑AN)、 1‑溴乙 酰基‑3， 3‑二硝基氮杂环丁 烷(RRx‑001)中的一种或几种， 并未 涉及韭菜子提取物。 [0004]比较典型的G6PD抑制剂有DHEA、 6 ‑AN、 RRx‑001、 虎杖苷(Polydatin)等。 但是DHEA 被证明进入体内后会被代谢分解掉， 产生活性雄激素， 从而 无法真正起到作用。 6 ‑AN则是具 有一定副作用， 包括神经损伤和导致 维生素B缺乏等。 RRx ‑001虽然是G6PD抑制剂， 但经过研 宄证明， 其抗肿 瘤机制本质上不是针对G6PD起作用， 而是通过与血红蛋白(Hb)和谷胱甘肽 (GSH)结合， 同时产生强细胞毒性的活性氧氮类物质(RONS)来发挥抗肿瘤作用的。 Polydatin的活性则是比较弱。 所以， 目前G6P D的抑制剂仍旧是亟 待开发的。说　明　书 1/4 页 3 CN 115487263 A 3