ICS 65.120 B 46 中华人民共和国国家标准 GB/T 19542—2007 代替GB/T19542—2004 饲料中磺胺类药物的测定 高效液相色谱法 Determination of sulfonamides in feedsHigh-performance liquid chromatograph 2007-06-21发布 2007-09-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T19542—2007 前言 本标准是GB/T19542一2004《饲料中磺胺二甲基嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶的测定 高效液相色谱 法》的修订版。 本标准与GB/T19542—2004主要差异如下： 补充了磺胺嘧啶、磺胺喹恶啉、磺胺甲恶唑三种磺胺药物的测定； 一增加了净化步骤。 本标准自实施之日起代替GB/T19542—2004。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：国家饲料质量监督检验中心（北京）。 本标准主要起草人：李兰、杨曙明、索德成、田河山、范理、赵根龙。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T19542—2004。 GB/T19542—2007 饲料中磺胺类药物的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中磺胺类药物：磺胺嘧啶、磺胺二甲基啶、磺胺间甲氧 啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉含量的方法 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中磺胺类药物的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 3原理 试样中磺胺类药物经乙睛振荡提取后，用碱性氧化铝小柱净化，注入高效液相色谱仪反相色谱系统 中进行分离，用紫外检测器或二极管矩阵检测器检测，外标法计算磺胺类药物的含量。 注：该方法最低定量限分别为：磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶5mg/kg：磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉 2 mg/kg。 4试剂和溶液 除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的三级用水。 4.1冰乙酸：优级纯。 4.2乙腈：色谱纯。 4.3乙腈：分析纯。 4.4甲醇：色谱纯。 250mL乙睛（4.2）混合、摇匀，过0.45um滤膜，脱气，备用， 4. 6 磺胺嘧啶标准品：纯度应大于97%。 4.7 磺胺二甲基嘧啶标准品：纯度应大于97%。 4.8 磺胺间甲氧嘧啶标准品：纯度应大于97%。 4.9 磺胺甲恶唑标准品：纯度应大于97%。 4.10 磺胺喹恶啉标准品：纯度应大于97%。 4.11磺胺嘧啶标准溶液 4.11.1磺胺嘧啶标准贮备液：准确称取已知纯度的磺胺嘧啶标准品100mg，精确至0.0001g，置于 100mL棕色容量瓶中，加乙睛（4.2）超声使之完全溶解，并定容至刻度，摇匀，该溶液中磺胺嘧啶浓度为 1mg/mL，于一16C保存可使用6个月。 4.11.2磺胺嘧啶标准中间液：准确移取磺胺嘧啶标准贮备液（4.11.1)5mL于50mL棕色容量瓶中， 用乙睛（4.2）定容至刻度，该溶液中磺胺嘧啶浓度为100μg/mL，于4℃保存可使用1个月 1 GB/T19542—2007 4. 11. 3 磺胺嘧啶标准工作液：准确移取磺胺嘧啶标准中间液（4.11.2)5mL于50mL棕色容量瓶中， 用流动相（4.5）定容至刻度，该溶液中磺胺嘧啶浓度为10μg/mL，当日使用。 4.12磺胺二甲基嘧啶标准溶液：配制过程同磺胺嘧啶。 4.13磺胺间甲氧嘧啶标准溶液：配制过程同磺胺嘧啶。 4.14磺胺甲恶唑标准溶液：配制过程同磺胺啶。 4.15磺胺喹恶啉标准溶液 4.15.1磺胺喹恶啉标准贮备液：准确称取已知纯度的磺胺喹恶啉标准品100mg，精确至0.0001g， 置于100mL棕色容量瓶中，加甲醇（4.4）超声使之完全溶解，并定容至刻度，摇匀，该溶液中磺胺喹恶 啉浓度为1mg/mL，于一16℃保存可使用6个月 瓶中，用流动相（4.5）定容至刻度，该溶液中磺胺喹恶啉浓度为10μg/mL，当日使用。 注：若单独测定各组分，也可配制标准工作液使测定组分的浓度在20ng～100ng之间。 4.16 6磺胺类药物混合标准工作液 分别移取磺胺类药物标准中间液各5mL于50mL棕色容量瓶中，用流动相（4.5）定容至刻度，该 溶液中磺胺药物的浓度均为10μg/mL，当日使用 注：若同时测定可配制混合标准工作液。 5仪器 5.1实验室常用仪器设备。 5.2具塞锥形瓶：150mL。 5.3振荡器。 5.4高效液相色谱仪：紫外检测器或二极管矩阵检测器。 5.5针头过滤器：备孔径为0.45um有机微孔滤膜 5.6碱性氧化铝SPE小柱：1000mg/12mL、120A。 6试样的选取和制备 6.1按GB/T14699.1采样。 6.2选取有代表性饲料样品至少500g，四分法缩减至100g，磨碎，全部通过40目筛，混匀，装人密闭 容器中，避光低温保存，备用。 7分析步骤 7.1试液的制备 7.1.1提取 称取配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料样品2g（精确至0.001g），置于具塞锥形瓶（5.2）中， 加人50mL的乙睛（4.3），于振荡器（5.3）振荡提取30min，过滤，滤液备用。 7.1.2净化 准确吸取试液（7.1.1）：配合饲料10mL~20mL；浓缩饲料、添加剂预混合饲料2mL，移入用 10mL乙睛淋洗过的碱性氧化铝小柱（5.5）中，令其自然流速流出。待试液（7.1.1）全部流出后，吹干， 用两次2mL流动相（4.5）洗脱，收集洗脱液，并过0.45μm的滤膜，滤液上机测定。 7.2色谱条件 7.2.1色谱柱：具有Cs填料的柱子（粒度为5μm），柱长250mm，内径4.6mm。 2 GB/T19542—2007 7.2.2流动相：25%乙睛水（4.5），以1.0mL/min流速洗脱。 7.2.3进样量：20μL。 7.2.4检测器：紫外检测器或二极管矩阵检测器，检测波长270nm。若单独测定磺胺啶检测波长为 268nm；磺胺二甲基嘧啶检测波长为266nm；磺胺间甲氧嘧啶检测波长为271nm；磺胺甲恶唑检测波 长为268nm；磺胺喹恶啉检测波长为246nm。 8定量测定 按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数。向液相色谱柱中注入待测定磺胺标准工作液或混合 标准工作液（4.16）及试样溶液（7.1），得到色谱峰面积响应值，用外标法定量。 9 结果计算 9.1试样中每种磺胺的含量分别按式（1)计算： PxVXciXV =m .(1) Psti Xm XV 式中： 试样中每种磺胺的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； Pi 试样溶液峰面积值； V 样品的总稀释体积，单位为毫升（mL）； 标准溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； 12 Vst——标准溶液进样体积，单位为微升（μuL)； Psti 标准溶液峰面积平均值； 试样质量，单位为克（g）； 试样溶液进样体积，单位为微升（μL）。 9.2 平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。 10 重复性 同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不大于10%。