ICS 65.020.30 B 40 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T203662006 动物源产品中喹诺酮类残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Method for the determination of quinolones in animal tissues- LC-MS/MS method 2006-05-25发布 2006-09-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T20366—2006 前言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国山东省质量技术监督局提出。 本标准起草单位：中华人民共和国山东出入境检验检疫局， 本标准主要起草人：林黎明、张鸿伟、梁增辉、王岩、孟兆宏。 GB/T20366—2006 动物源产品中喹诺酮类残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了动物源产品中11种诺酮类残留量液相色谱-串联质谱的测定方法。 本标准适用于禽、兔、鱼、虾等动物源产品中11种喹诺酮类残留的确证和定量测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987） 3原理 试样中喹诺酮类残留，采用甲酸-乙睛提取，提取液用正已烷净化。液相色谱-串联质谱仪测定，外 标法定量。 4试剂和材料 4.1水：应符合GB/T6682中一级水的规定。 4.2乙：液相色谱级。 4.3冰乙酸：液相色谱级。 4.4正已烷：液相色谱级。 4.5甲酸：优级纯。 待分配平衡后，弃去乙腈层既得 4.72%甲酸溶液：2mL甲酸用水稀释至1000mL，混匀。 4.8甲酸-乙溶液：98mL乙中加入2mL甲酸，混匀。 4.9伊诺沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、洛美沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、双 氟沙星、司帕沙星标准品：纯度≥99%。 4.1011种喹诺酮类标准贮备溶液：0.1mg/mL。分别准确称取适量的每种喹诺酮标准品，用乙睛配 制成0.1mg/mL的标准贮备溶液（4℃保存可使用3个月）。 4.1111种喹喏酮类标准中间溶液：10μg/mL。分别准确量取适量的每种喹诺酮标准贮备溶液 （4.10），用乙稀释成10μg/mL的标准中间溶液（4℃保存可使用1个月）。 4.1211种喹诺酮类混合标准工作溶液：准确量取适量的喹喏酮类标准中间溶液（4.11），用甲酸-乙睛 溶液（4.8）配制成浓度系列为5.0ng/mL、10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL、 250.0ng/mL、500.0ng/mL的喹诺酮类混合标准工作溶液（4℃保存可使用1周）。 4. 13 311种喹诺酮类混合标准添加溶液：100ng/mL。准确量取适量的喹喏酮类标准中间溶液 （4.11），用乙睛稀释成100ng/mL的喹喏酮类标准添加溶液（4℃保存可使用1周）。 1 GB/T20366—2006 5仪器 5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2高速组织捣碎机。 5.3均质器。 5.4 旋转蒸发仪。 5.5 氮吹仪。 5.6 涡流混匀器。 5.7 离心机：转速4000r/min。 5.8 分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台。 5.9 移液器：200μL，1mL。 5. 10 棕色鸡心瓶：100mL。 5. 11 聚四氟乙烯离心管：50mL。 5. 12 分液漏斗：125mL。 5. 13 一次性注射式滤器：配有0.45um微孔滤膜。 5.14样品瓶：2mL，带聚四氟乙烯旋盖。 6试样制备与保存 6.1试样制备 样品经高速组织捣碎机均匀捣碎，用四分法缩分出适量试样，均分成两份，装入清洁容器内，加封后 作出标记。一份作为试样，一份作为留样。 6.2试样保存 试样应在一20℃条件下保存。 7测定步骤 7.1标准曲线制备 制备混合标准工作液（4.12），浓度系列分别为5.0ng/mL、10.0ng/mL、25.0ng/mL、 50.0ng/mL、100.0ng/mL、250.0ng/mL、500.0ng/mL（分别相当于测试样品含有1.0μg/kg、 2.0μg/kg、5.0μg/kg、10.0μg/kg、20.0μg/kg、50.0μg/kg、100.0μg/kg目标化合物）。按7.4的规 定测定并制备标准曲线。 7.2提取 称取5.0g试样，置于50mL聚四氟乙烯离心管中，加20mL甲酸-乙睛溶液（4.8），用均质器均 质1min，然后，于离心机上以4000r/min的速率离心5min，将上清液移入另一个50mL聚四氟乙烯 离心管中。将离心残渣用20mL甲酸-乙睛溶液（4.8)再提取一次，合并上清液。 7.3净化 将上清液转移到125mL分液漏斗中，于上清液中加入25mL乙睛饱和的正已烷（4.6），振摇 2min，弃去上层溶液，将下层溶液移至100mL棕色鸡心瓶中，于40℃水浴中旋转蒸发至近干，用氮气 流吹干。准确加人1.0mL甲酸-乙睛溶液（4.8）溶解残渣，涡流混匀后，用一次性注射式滤器过滤至样 品瓶中，供液相色谱-串联质谱仪测定 7.4测定 7.4.1液相色谱条件 a）色谱柱：Ci柱（可用IntersilODS-3，粒径5μm，柱长150mm，内径4.6mm或相当者）； b) 流动相：乙睛+2%甲酸溶液（梯度洗脱见表1）； 2 GB/T20366—2006 表 1 时间/min 乙腈/(%) 2%甲酸溶液/（%） 0 15 85 20 17 83 c) 流速：0.8mL/min; 进样量：20μL。 d) 7. 4.2 质谱条件 a) 离子源：电喷雾离子源； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测； d) 电喷雾电压：5500V； e) 雾化气压力：0.413MPa； f) 气帘气压力：0.344MPa； g) 辅助气压力：0.586MPa； h) 离子源温度：500℃； i) 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压，见表2。 表2 11种喹诺酮类的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压 定性离子对/(m/z) 定量离子对/(m/z) 名 称 碰撞气能量/eV 去簇电压/V （母离子/子离子） （母离子/子离子） 30 93 320.9/303.0 伊诺沙星 320.9/303.0 320.9/234.0 33 76 361.9/318.0 29 89 氧氟沙星 361.9/318.0 361.9/261.0 41 104 92 320.0/302.0 诺氟沙星 320.0/302.0 320.0/233.0 36 77 334.0/316.0 33 95 培氟沙星 334.0/316.0 334.0/290.0 28 77 332.0/314.0 32 92 环丙沙星 332.0/314.0 332.0/230.9 53 92 351.9/265.0 36 78 洛美沙星 351.9/265.0 351.9/334.0 30 66 358.0/340.0 36 95 丹诺沙星 358.0/340.0 358.0/254.9 55 95 360.0/316.0 29 90 恩诺沙星 360.0/316.0 360.0/244.9 40 06 386.0/299.0 45 88 沙拉沙星 386.0/299.0 386.0/367.9 42 83 400.0/356.0 30 90 双氟沙星 400.0/356.0 400.0/382.0 35 100 393.0/349.0 30 109 司帕沙星 393.0/349.0 393.0/292.0 36 109 3