ICS 67.050 X 04 GR 中华人民共和国国家标准 GB/T 21174—2007 动物源性食品中β-内酰胺类药物 残留测定方法 放射受体分析法 Determination of β-Lactams residues in animal derived food- Radio-receptor assay method 2007-10-29发布 2008-04-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 21174—2007 前言 本标准的附录A为规范性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局 本标准主要起草人：郑晶、林杰、黄晓蓉、杨方、陈彬、翁国柱、陈健 本标准系首次发布。 GB/T21174—2007 动物源性食品中-内酰胺类药物 残留测定方法放射受体分析法 1范围 本标准规定了肉类和水产品中β-内酰胺类药物残留测定的制样和放射受体分析方法。 本标准适用于肉类和水产品中β-内酰胺类药物残留的筛选测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987） 3试样制备和保存 3.1试样制备 从原始样品中取出部分有代表性样品，应尽可能将脂肪剔除。将可食部分放人高速组织捣碎机均 质，充分混匀，用四分法缩分不少于500g试样。装入清洁容器内，并标明标记。 制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化，用于测定的样品细菌数不能超过 10%个/g。 3.2试样保存 试样于一18℃以下保存，新鲜或冷冻的组织样品可在2℃～6℃贮存72h 4测定方法 4.1原理 测定的基础是连续性受体免疫反应，样品中残留的β-内酰胺类药物和[1"CI标记的青霉素G分别与 微生物细胞上的特异性受体结合。用液体闪烁计数仪测定样品中的[l*C含量的计数值（cpm），计数值 与样品中的β-内酰胺类药物残留量成反比。 4.2试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.2.1CharmⅡ组织中的β-内酰胺类药物测定试剂盒。 4.2.1.1阴性对照浓缩干粉：贮存于2℃～6℃。使用时用10mL水溶解，配制成阴性组织液。阴性组 织液可在2℃～6℃中保存48h。如长时间不用，可于一15℃以下冷冻保存2个月，使用时将其解冻，解 冻后的溶液可在2℃～6℃保存24h。 4.2.1.2MSU多种抗生素标准品：贮存于2℃~6℃。使用时用10mL水溶解，配制成MSU多种抗 生素标准溶液（其中青霉素G浓度为1000μg/L)。MSU多种抗生素标准溶液保存方法同4.2.1.1。 4.2.1.3MSU萃取缓冲液浓缩干粉：使用时用1000mL水溶解，配制成MSU萃取缓冲液，可在 1）CharmII组织中的β-内酰胺类药物测定试剂盒和CharmII液体闪烁计数仪是由CharmScience公司提供的产品 的商品名。给出这一信息是为了方使本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同 的效果，则可使用这些等效产品。 1 GB/T211742007 2℃～6℃保存2个月。 4.2.1.4M2缓冲液浓缩干粉：使用时用50mL水溶解，配制成M2缓冲液，可在2℃~6℃保存 2个月。 4.2.1.5受体试剂片剂：绿色片剂，于一15℃以下冷冻保存。 4.2.1.6［4C标记的青霉素G片剂：黄色药片，于一15℃以下冷冻保存。 4.2.21mol/L盐酸：8.32mL浓盐酸加水定容至1000mL。 4.2.3闪烁液。 4.2.4pH试条。 4.2.5离心管：50mL。 4.2.6硅硼酸盐玻璃试管及试管塞。 4.2.7药片压杆。 4.3仪器和设备 4.3.1CharmⅡI液体闪烁计数仪"。 4. 3. 2 离心机：4000r/min。 4.3.3 高速组织捣碎机。 4.3.4涡旋混合器。 4.3.5加热器：90℃。 4.3.6移液器：1mL~5mL,100μL~1000μL。 5分析步骤 5.1对照液的配制 5.1.1阴性对照液的配制：取2mL阴性组织液（4.2.1.1），加人6mLMSU萃取缓冲溶液（4.2.1.3） 中混匀，制成阴性对照液，该对照液可在室温下保存6h。 5.1.2阳性对照液的配制：取0.3mLMSU多种抗生素标准溶液（4.2.1.2）,加入6mL阴性组织液 （4.2.1.1）中混匀，然后从中取2mL混合溶液加人到6mLMSU萃取缓冲溶液（4.2.1.3）中混匀，制成 阳性对照液，该对照液可在室温下保存6h。 5.2试样提取 5.2.1称取10g（精确到0.1g）均质好的试样于50mL离心管，加入30mLMSU萃取缓冲溶液 （4.2.1.3），涡旋振荡5min。 5.2.2将离心管置80℃土2℃孵育器内孵育30min，再将离心管置冰水内10min后，3300r/min离心 10 min。 5.2.3吸出上清液，注意不要将漂浮的脂肪颗粒混入上清液内。恢复室温后，用pH试条检查pH是 否为7.5。如不准确，用M2缓冲液（4.2.1.4)或1mol/L盐酸调整至pH7.5，即为样品测试液。 5.3测定 5.3.1用药片压杆的平端将受体试剂片剂（4.2.1.5)压人一洁净的玻璃试管内，加300μL水到试管内 用涡旋混合器振荡10s，使药片振碎均匀。 5.3.2用移液器加2.0mL样品测试液，或阴性对照液（5.1.1)或阳性对照液（5.1.2)到试管内。用涡 旋混合器振荡10s，上下来回10次。于55℃士1℃孵育2min。 5.3.3从孵育器中取出试管，用药片压杆的平端压入［14C标记的青霉素G片剂（4.2.1.6）用涡旋混 合器振荡10s，上下来回10次。置55℃土1℃孵育2min。 5.3.4取出试管，于3300r/min离心3min。离心停止后立即取出试管，倒掉上清液，用吸水材料吸 干管口边缘处的污渍。 5.3.5加300μL水到试管内，振荡并混合均匀（新鲜牛肉组织样品用300μL10%L-抗坏血酸溶液）。 2 GB/T21174—2007 再加人3mL闪烁液（4.2.3）到试管内。将试管塞盖上后，涡旋混匀。 5.3.6将试管放入液体闪烁计数仪内，读[14C项的计数值。 注：建议1次同时进行6支试管以下的测定。 5.4控制点的确定 5.4.1控制点是判断样品阴性与初筛阳性的一个界定值，可根据筛选水平自行设定。 5.4.2筛选水平为25ug/kg时，控制点设定步骤：称取10g均质好的同类空白组织样品，加入 0.25mLMSU多抗生素标准溶液，充分混匀制成标准样品，按5.2和5.3进行测定。测定6个非重复 的加标样品的计数值，求出平均值乘上系数1.2，即为筛选水平25ug/kg的控制点。 5.4.3当筛选水平大于25ug/kg的样品时，可将样品测试液适当稀释后测定 5.5结果判定 5.5.1当样品的计数值大于控制点时，判定为“阴性” 5.5.2当样品的计数值小于或等于控制点时，应重新测定样品，且同时需要测定阴性对照液和阳性对 照液。阴性对照液和阳性对照液的计数值，需在正常范围波动（见第A，3章）。当重新测定样品的计数 值大于控制点时，判定为“阴性”；小于或等于控制点时，则判定为“初筛阳性”。 6确证 本方法为初筛方法，阳性结果应用其他方法进行确证。 7检测限 在肉类和水产品中，本方法检测限以青霉素G计β-内酰胺类药物（包括青霉素G、氨苄西林、阿莫 西林、邻氯青霉素、双氯青霉素、头孢噻呋）总量为25μg/kg。