ICS 11. 220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 542—2002 茨城病和鹿流行性出血病琼脂凝胶 免疫扩散试验方法 Agar gel immunodiffusion test for ibaraki and epizootic haemorrhagic disease 行业标准信息服务平台 2002-08-27发布 2002-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 542—2002 前 言 茨城病和鹿流行性出血病是由呼肠孤病毒科、环状病毒属同一病毒群经媒介昆虫传播的传染病,能 感染家养及野生的反台动物，在国外曾造成严重损失；其血清与蓝舌病有交叉反应，应加以鉴别。本标准 提供了相应的检测和鉴别方法。 本标准是根据澳大利亚热带动物科学LongPoket实验室（CSIRODivisionof TropicalAnimal Science Long Poket Laboratories)的方法和本国的实验研究成果制定的。 本标准由农业部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：中华人民共和国农业部动物检疫所。 本标准主要起草人：李晓成、张燕霞。 行业标准信息服务平台 NY/T 542—2002 茨城病和鹿流行性出血病琼脂凝胶 免疫扩散试验方法 1范围 本标准规定了茨城病和鹿流行性出血病琼脂凝胶免疫扩散试验技术， 本标准适用于茨城病及鹿流行性出血病病毒特异性抗体的检测及流行病学调查。 2琼脂凝胶免疫扩散试验方法 2.1材料 2.1.1器材与试剂： 打孔器：内径4mm。 琼脂糖：电泳纯琼脂。 氯化钠、叠氮钠。 2.1.2琼脂扩散抗原。 2.1.3标准阳性血清。 2.1.4被检血清：按常规方法采血分离血清，4℃条件下10d内检测有效；一20℃冻结保存，年有效。 2.2琼脂凝胶平板的制备 2.2.1成分 琼脂糖 0.8g 氯化钠 0. 85 g 0. 01 g 叠氮钠 蒸馏水 100 mL 2.2.2配制方法 上述各种试剂置于100mL蒸馏水中混合后加热充分溶解，分装刻度试管中塞紧后4℃保存，有效 期2个月。 2.2.3平板制作 将分装于刻度试管中的琼脂凝胶充分熔化冷却至50℃～60℃后，倒在干净的载玻片、玻璃片或平 血上，凝胶厚度为2.5mm。注意不要产生气泡，浇好的板须放在平台上，等凝胶凝固后即可使用。 2.3操作方法 2.3.1将琼脂凝胶平板按图1所示的图型打孔，孔径4mm，孔距3mm，孔内琼脂糖用针头小心挑出， 勿破坏周围琼脂，打孔后用酒精灯加热封底。 4 图1琼脂凝胶平板打孔示意图 1