ICS13.300;13.020 CCS A 80 中华人民共和国国家标准 GB/T42880—2023 化学品 蜜蜂(Apis mellifera L.) 慢性经口毒性试验（10天饲喂法） Chemicals-Honeybee (Apis mellifera L.), chronic oral toxicity test (10-day feeding) 2023-08-06发布 2023-12-01实施 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T42880—2023 目 次 前言 引言 范围 1 2 规范性引用文件 3 术语、定义和缩略语· 受试物信息 4 5 参比物 6 试验原理 7 方法描述 8 试验程序 9 质量保证与质量控制 10 数据与报告· 参考文献· GB/T42880—2023 前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件起草单位：广东中科英海科技有限公司、生态环境部固体废物与化学品管理技术中心、广东 技术有限公司、中国检验检疫科学研究院、浙江亚旺科技有限公司。 本文件主要起草人：张宏涛、张宝兰、梅承芳、刘纯新、梁慧君、曾国驱、梁志民、张瑞明、张晶、 霍嘉维、汤保华、周丽丽、叶芷君、陈智勇、王哲思 GB/T42880—2023 引言 本文件是实验室条件下进行的成年工蜂10d慢性经口毒性试验方法。 蜜蜂等授粉昆虫可通过存贮、进食蜂巢中已受污染的食物，或者在污染区域觅食而长期暴露于各种 植保产品（PPP）或化学品。为了解决上述潜在的风险，可在实验室给成年工蜂连续10d饲喂经过处理 的食物（蔗糖溶液）进行慢性毒性试验研究。 采用本文件对混合物开展测试并获得相关数据以达到指定的监管目的之前，宜考虑这样做是否（以 及为何）可为达到上述目的提供充分的试验结果。当有法规明确要求可对混合物进行测试时，则无需有 此顾虑。 GB/T 42880—2023 化学品蜜蜂（ApismelliferaL.） 慢性经口毒性试验（10天饲喂法） 1范围 比物、试验原理、方法描述、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。 本文件适用于测试和评价化学品对蜜蜂（ApismellferaL.）的慢性经口毒性。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于 本文件。 GB/T 21845 化学品水溶解度试验 GB/T 21855 化学品与pH有关的水解作用试验 GB/T 22052 用液体蒸汽压力计测定液体的蒸汽压力温度关系和初始分解温度的方法 GB/T 22228 工业用化学品 固体及液体的蒸汽压在10-1Pa至105Pa范围内的测定静态法 GB/T 22229 工业用化学品固体及液体的蒸汽压在10-3Pa至1Pa范围内的测定蒸气压平 衡法 3术语、定义和缩略语 3 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1.1 x%效应致死浓度 lethal concentrationforx% effect LC 与对照组相比，在给定的暴露期间内引起%试验生物死亡的受试物浓度。 3.1.2 半数致死浓度 medianlethalconcentration LCso 经过统计计算，在试验结束时引起50%试验生物死亡的受试物浓度。 注：本文件中LCso值表示为每千克食物中有效成分或制剂的含量，mg（或μg)/kg。 3.1.3 半数致死摄食剂量 median lethal dietary dose LDD50 经过统计计算，在试验结束时引起50%试验生物死亡的受试物摄食剂量 注：本文件中LDDso值表示为每只蜜蜂每日摄食有效成分或制剂的剂量·μg（或ng)/（蜂·d)。 1 GB/T42880—2023 3.1.4 最低可观察效应浓度lowestobservedeffectconcentration；LOEC 与对照组相比，产生的效应有统计学显著性差异的最低试验浓度 注：本文件中LOEC值表示为每千克食物中有效成分或制剂的含量，mg（或ug)/kg。 3.1.5 最低可观察效应摄食剂量lowestobservedeffectdietarydose；LOEDD 与对照组相比，产生的效应有统计学显著性差异的最低试验摄食剂量， 注：本文件中LOEDD值表示为每只蜜蜂每日摄食有效成分或制剂的剂量，ug（或ng)/（蜂·d)。 3.1.6 无可观察效应浓度 noobservedeffectconcentration;NOEC 未观察到与对照组有统计学显著性差异效应以及接近LOEC的最高试验浓度。 注：如果LOEC无法确定，NOEC可认为大于或等于最高试验浓度。限度试验中，如果试验浓度的效应与对照组无 显著性差异，NOEC可认为大于或者等于该限度试验浓度。本文件中的NOEC值表示为每千克食物中有效成 分或制剂的含量，mg(或μg)/kg。 3.1.7 无可观察效应摄食剂量noobservedeffectdietarydoseNOEDD 未观察到与对照组有统计学显著性差异效应以及接近LOEDD的最高试验摄食剂量。 注：如果LOEDD无法确定，NOEDD可认为大于或等于最高试验摄食剂量。限度试验中，如果试验摄食剂量的效 应与对照组无显著性差异，NOEDD可认为大于或者等于该限度试验摄食剂量。本文件中NOEDD值表示为每 只蜜蜂每日摄食有效成分或制剂的剂量·ug（或ng)/（蜂·d）。 3.2 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 a.i.：有效成分（AvailableIngredient) 4受试物信息 受试物可以是活性物质或者制剂 在试验前，应掌握受试物的下列信息： a）纯度； b) 水中溶解度，按照GB/T21845的规定； c)） 受试物在水溶液中的定量分析方法； d) 水解作用，按照GB/T21855的规定； e） 蒸气压，按照GB/T22052、GB/T22228、GB/T22229的规定和见OECDNo.104L6。 注：测定上述参数的温度在试验报告中予以说明。 5参比物 试验中宜使用参比物确保试验蜜蜂的敏感性和试验系统的可靠性。首选参比物为乐果（原药或制 剂；CASNo.60-51-5）。参比物的一个浓度宜能导致试验期结束时预期死亡率不小于50%，以证明蜜蜂 的敏感性和试验系统的可靠性。有效成分在0.5mg/kg和1.0mg/kg饲喂液之间的参比物浓度可使蜜 蜂慢性暴露后死亡率不小于50%。 2 GB/T42880—2023 6试验原理 连续10d不限量地饲喂幼蜂（最大2日龄）含有受试物的500g/L蔗糖水溶液，试验期间每天观察 并记录蜜蜂的死亡数及异常行为。通过对比受试物处理组与对照组的试验结果来评价受试物对蜜蜂的 慢性效应。对结果进行分析，计算半数致死浓度（LC50）和连续10d暴露后的半数致死摄食剂量 （LDDse），并求出无可观察效应浓度（NOEC）和无可观察效应摄食剂量（NOEDD）。 某些情况例如受试物毒性较低或者受试物难溶时，可以进行限度试验，当试验过程中未观察到毒性 效应时，说明NOEDD大于或等于限度剂量以及LDDso大于限度剂量。 7方法描述 7.1受试蜂 7.1.1用于试验的蜜蜂宜为幼年工蜂，最大2日龄，以保证试验开始时蜜蜂处于相近龄期。应从无病 害、来源和生理状态明确、含蜂王的蜂群的子脾中收集。此外，试验前一个月内蜂巢不能施用化学物质， 比如抗生素、除螨剂等。如果一个蜂群中收集不到足够的受试蜂，可采用其他蜂群中的子脾，但需确保 所有蜜蜂合理分配至各处理组。同龄期封盖子脾可以放在人工气候箱中孵化，或用隔王产卵器装着，放 置蜂箱中直至孵化。第一种方法需要确保该子脾上的蜂蜜和花粉充足，或放入另外一张含有花粉蜂蜜 的子脾提供食物。 7.1.2试验前一天，收集从子脾孵出的蜜蜂，并分装到试验蜂笼中，收集过程不能麻醉蜜蜂。蜜蜂（孵 出后1d的蜜蜂）应在试验条件下适应1d。适应和试验期间，不限量投喂蜜蜂蔗糖溶液，不需额外饲喂 花粉和水。试验前蜜蜂无须饥饿。 7.2试验蜂笼 7.2.1使用方便清理或一次性的通风性良好的蜂笼进行试验。试验蜂笼的材质可选用任何合适的材 质，如不锈钢、硬纸板、金属丝网、塑料以及一次性木质材质等。 7.2.2每笼10只蜜蜂，因为该数量可准确评估有效应蜜蜂与无效应蜜蜂之间的差异。蜂笼的大小需 保障10只蜜蜂有足够的活动空间，最小200cm/10只蜜蜂。 7.3饲喂液准备 7.3.1对照组、受试物处理组以及参比物处理组饲喂液均用500g/L的蔗糖水溶液配制。在各个饲喂 期（约24h）内，确保所有饲喂液均匀分散且无明显沉淀。 7.3.2将受试物配制成贮备液或直接将受试物用500g/L蔗糖水溶液混合配制（试验饲喂液）。配制贮 备液时，若受试物水溶性好，可用去离子水溶解，当其水溶性较差时，可用丙酮作为溶剂。有机溶剂添加 的浓度取决于受试物的溶解度，同时确保各处理浓度组添加浓度一致。最终添加的饲喂液中丙酮的最 大浓度不得超过5%。在满足对照组的有效性标准条件下，任何其他溶剂、增溶剂或增稠剂都可使用 例如用于增加24h饲喂期内饲喂液的均匀性等。依据受试物在溶液中的稳定性，整个试验周期可只配 制一次贮备液，并密封冷藏于黑暗环境中（冰箱，6℃土2℃），若受试物在水或丙酮溶液中快速降解，则 需每天或适当的时间间隔新鲜配制贮备液 7.3.3最终添加的饲喂