ICS 11.220 B 41 DB35 福 建 省 地 方 标 准 DB35/T 1335—2013 猪繁殖与呼吸综合征抗体检测方法 免疫金试纸法 Detection of antibodies against porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS) - Protocol of gold immuno-chromatography assay 2013-04-02 发布 福建省质量技术监督局 2013-07-05 实施 发 布 DB35/T 1335—2013 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写》给出的规则编制。 本标准由中华人民共和国厦门出入境检验检验局提出并归口。 本标准负责起草单位：厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心、厦门市波生生物技术有限公司。 本标准主要起草人：孔繁德、徐淑菲、张长弓、黄印尧、陈信忠、龚艳清、郭书林、杨俊萍、周斌 华。 I DB35/T 1335—2013 猪繁殖与呼吸综合征抗体检测方法 免疫金试纸法 1 范围 本标准规定了猪繁殖与呼吸综合征抗体的免疫金试纸法的原理、检测仪器和材料、操作步骤和结果 判定。 本标准适用于猪血清、血浆或全血中猪繁殖与呼吸综合征抗体的检测，可用于猪繁殖与呼吸综合征 的诊断、检疫和监测。 2 缩略语 下列缩略语适用于本标准。 PRRS：猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome） 3 原理 当试纸用于检测时，在加样孔（S）内加入待检猪血液或猪血清样品，由于层析作用，血清溶解玻 璃纤维膜中胶体金标记的 PRRS 抗原后继续向检测区方向移动，首先遇到检测区的检测线（T） ，如果样 品中有 PRRS 抗体存在，那么抗体在流动的过程中与胶体金标记的 PRRS 抗原结合，然后流动到硝酸纤维 素膜检测线（T） ，再与检测线（T）上的 PRRS 抗原结合，形成胶体金标记 PRRS 抗原-PRRS 抗体-PRRS 抗原的免疫复合物，在检测线（T）上形成一条紫红色色带，剩余的胶体金标记 PRRS 抗原继续往检测区 的对照线（C）移动，与兔抗 PRRS 抗体结合形成一条紫红色色带，以此证明该检测试纸有效。若在检测 区和对照区各形成一条紫红色线，则视为 PRRS 抗体阳性。PRRS 抗体滴度越高，结合胶体金标记的 PRRS 抗原就越多，检测线出现的紫红色色带就越深。 4 检测仪器与材料 4.1 PRRS 标准阳性血清和阴性血清。 4.2 PRRS 抗体免疫金试纸检测卡或检测试纸条。 4.3 离心机：离心速度不小于 3000 r/min。 4.4 微量取样器。 5 操作步骤 5.1 样品制备 5.1.1 采血 无菌条件下采血 2 mL。 1 DB35/T 1335—2013 5.1.2 分离血清 静置血样，待血液凝固后，取上部血清液体，若不易获取或与红细胞混匀，可通过 3000 r/min， 离心机离心 3 min，取上部血清液体，待测。 5.2 检测步骤 5.2.1 检测卡的操作 取出检测卡，用微量取样器吸取血清或血液样品 100 µL 直接加到加样孔（S）上，18 ℃～25 ℃静 置，在 20 min～30 min 内观察结果。 5.2.2 检测试纸条的操作 用微量取样器吸取血清或血液样品 100 µL 直接加到酶标板的加样孔上，然后取出检测试纸条，将 含有胶体金的一端插入含有血清或血液的酶标板孔中，18 ℃～25 ℃静置，在 20 min～30 min 内观察 结果。 6 结果判定 在检测线（T）和对照线（C）各出现一条紫红色线，判定为被检样品中含有 PRRS 抗体；只在对照 线（C）出现一条紫红色线，而检测线（T）没有出现紫红色线，判定为被检样品中的 PRRS 抗体阴性； 对照线（C）不出现紫红色线，本试验无效，需重新检测。 2 DB35/T 1335－2013 福 建 省 地 方 标 准 猪繁殖与呼吸综合征抗体检测方法 免疫金试纸法 DB35/T 1335—2013 * 2013 年 6 月第一版 2013 年 6 月第一次印刷