中华人民共和国国家标准 GB4789.3—2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB4789.3—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB4789.3—2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》、 GB/T4789.32—2002《食品卫生微生物学检验 大肠菌群的快速检测》和SN/T0169—2010《进出口 食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法》大肠菌群计数部分。 本标准与GB4789.3—2010相比,主要变化如下: ———增加了检验原理; ———修改了适用范围; ———修改了典型菌落的形态描述; ———修改了第二法平板菌落数的选择; ———修改了第二法证实试验; ———修改了第二法平板计数的报告。GB4789.3—2016 1 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数 1 范围 本标准规定了食品中大肠菌群(Coliforms)计数的方法。 本标准第一法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数;第二法适用于大肠菌群含量较 高的食品中大肠菌群的计数。 2 术语和定义 2.1 大肠菌群 Coliforms 在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 2.2 最可能数 Mostprobablenumber;MPN 基于泊松分布的一种间接计数方法。 3 检验原理 3.1 MPN法 MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后,根据其未 生长的最低稀释度与生长的最高稀释度,应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。 3.2 平板计数法 大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸,在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色,带有或不带 有沉淀环的菌落。 4 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下: 4.1 恒温培养箱:36℃±1℃。 4.2 冰箱:2℃~5℃。 4.3 恒温水浴箱:46℃±1℃。 4.4 天平:感量0.1g。 4.5 均质器。 4.6 振荡器。 4.7 无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。 4.8 无菌锥形瓶:容量500mL。 4.9 无菌培养皿:直径90mm。GB4789.3—2016 2 4.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 4.11 菌落计数器。 5 培养基和试剂 5.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨(laurylsulfatetryptose,LST)肉汤:见A.1。 5.2 煌绿乳糖胆盐(brilliantgreenlactosebile,BGLB)肉汤:见A.2。 5.3 结晶紫中性红胆盐琼脂(violetredbileagar,VRBA):见A.3。 5.4 无菌磷酸盐缓冲液:见A.4。 5.5 无菌生理盐水:见A.5。 5.6 1mol/LNaOH溶液:见A.6。 5.7 1mol/LHCl溶液:见A.7。 第一法 大肠菌群MPN计数法 6 检验程序 大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。 图1 大肠菌群MPN计数法检验程序