中华人民共和国国家标准 GB5009.128—2016 食品安全国家标准 食品中胆固醇的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.128—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.128—2003《食品中胆固醇的测定》、GB/T22220—2008《食品中胆固醇的 测定 高效液相色谱法》和GB/T9695.24—2008《肉与肉制品 胆固醇含量测定》。 本标准与GB/T5009.128—2003相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准食品中胆固醇的测定”; ———增加了气相色谱法作为第一法,高效液相色谱法作为第二法;比色法改为第三法; ———修改了GB/T9695.24—2008气相色谱法的前处理方法中提取溶剂、无水乙醇的添加量和定 容体积。GB5009.128—2016 1 食品安全国家标准 食品中胆固醇的测定 1 范围 本标准规定了食品中胆固醇的测定方法。 本标准适用于食品中胆固醇的测定,第一法气相色谱法适用于肉及肉制品、蛋及蛋制品、乳及乳制 品等各类动物性食品以及植物油脂中胆固醇的测定;第二法高效液相色谱法适用于肉及肉制品、蛋及蛋 制品、乳及乳制品等各类动物性食品中胆固醇的测定;第三法比色法适用于肉及肉制品、蛋及蛋制品等 动物性食品中胆固醇的测定。 第一法 气相色谱法 2 原理 样品经无水乙醇-氢氧化钾溶液皂化,石油醚和无水乙醚混合提取,提取液浓缩至干,无水乙醇溶解 定容后,采用气相色谱法检测,外标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.1.2 无水乙醇(C2H5OH)。 3.1.3 石油醚:沸程30℃~60℃。 3.1.4 无水乙醚(C4H10O)。 3.1.5 无水硫酸钠(Na2SO4)。 3.1.6 氢氧化钾(KOH)。 3.2 试剂配制 3.2.1 60%氢氧化钾溶液:称取60g氢氧化钾,缓慢加水溶解,并定容至100mL。 3.2.2 石油醚-无水乙醚混合液(1+1,体积比):将石油醚和无水乙醚等体积混合均匀。 3.3 标准品 胆固醇标准品(C27H46O,CAS号:57-88-5):纯度≥99%。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 胆固醇标准储备液(1.0mg/mL) 称取胆固醇标准品0.05g(精确至0.1mg),用无水乙醇溶解并定容至50mL,放置0℃~4℃密封GB5009.128—2016 2 可贮藏半年。 3.4.2 胆固醇标准系列工作液 分别吸取标准储备液(1.0mg/mL)25μL、50μL、100μL、500μL、2000μL,用无水乙醇定容至10mL, 该标准系列工作液的浓度分别为2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、200μg/mL。现用现配。 4 仪器和设备 4.1 气相色谱仪:配有氢火焰离子化检测器(FID)。 4.2 电子天平:感量为1mg和0.1mg。 4.3 匀浆机。 4.4 皂化装置。 5 分析步骤 5.1 试样制备 5.1.1 肉及肉制品等各类固体试样 取样品的可食部分200g进行均质。将试样装入密封的容器里,防止变质和成分变化。试样应在 均质化24h内尽快分析。 5.1.2 植物油脂、乳品等液体试样 取混匀后的均匀液体试样装入密封容器里待测。 5.2 样品处理 5.2.1 皂化 称取制备后的样品0.25g~10g(准确至0.001g,胆固醇含量约为0.5mg~5mg),于250mL圆底 烧瓶中,加入30mL无水乙醇,10mL60%氢氧化钾溶液,混匀。将试样在100℃磁力搅拌加热电热套 皂化回流1h,不时振荡防止试样黏附在瓶壁上,皂化结束后,用5mL无水乙醇自冷凝管顶端冲洗其内 部,取下圆底烧瓶,用流水冷却至室温。 5.2.2 提取 定量转移全部皂化液于250mL分液漏斗中,用30mL水分2次~3次冲洗圆底烧瓶,洗液并入分 液漏斗,再用40mL石油醚-无水乙醚混合液(1+1,体积比)分2次~3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗, 振摇2min,静置,分层。转移水相,合并三次有机相,用水每次100mL洗涤提取液至中性,初次水洗时 轻轻旋摇,防止乳化,提取液通过约10g无水硫酸钠脱水转移到150mL平底烧瓶中。 5.2.3 浓缩 将上述平底烧瓶中的提取液在真空条件下蒸发至近干,用无水乙醇溶解并定容至5mL,待气相色 谱仪测定。 不同试样的前处理需要同时做空白试验。