中华人民共和国国家标准 GB5009.209—2016 食品安全国家标准 食品中玉米赤霉烯酮的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.209—2016 1 前 言 本标准代替GB/T5009.209—2008《谷物中玉米赤霉烯酮的测定》、GB/T23504—2009《食品中玉 米赤霉烯酮的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法》、SN/T1745—2006《进出口大豆、油菜籽和食 用植物油中玉米赤霉烯酮的检验方法》、SN/T1772—2006《进出口粮谷中玉米赤霉烯酮的测定 免疫 亲和柱-液相色谱法》,代替GB/T21982—2008《动物源食品中玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉 烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》中玉米 赤霉烯酮的检测方法。 本标准与GB/T5009.209—2008相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中玉米赤霉烯酮的测定”; ———增加了适用范围; ———增加了荧光光度法作为第二法; ———增加了固相萃取柱净化液相色谱-质谱法作为第三法。GB5009.209—2016 2 食品安全国家标准 食品中玉米赤霉烯酮的测定 1 范围 本标准规定了食品中玉米赤霉烯酮的测定方法。 本标准第一法适用于粮食和粮食制品,酒类,酱油、醋、酱及酱制品,大豆、油菜籽、食用植物油中玉 米赤霉烯酮的测定,第二法适用于大豆、油菜籽、食用植物油中玉米赤霉烯酮的测定,第三法适用于牛 肉、猪肉、牛肝、牛奶、鸡蛋中玉米赤霉烯酮的测定。 第一法 液相色谱法 2 原理 用乙腈溶液提取试样中的玉米赤霉烯酮,经免疫亲和柱净化后,用高效液相色谱荧光检测器测定, 外标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.1.2 乙腈(CH3CN):色谱纯。 3.1.3 氯化钠(NaCl)。 3.1.4 氯化钾(KCl)。 3.1.5 磷酸氢二钠(Na2HPO4)。 3.1.6 磷酸二氢钾(KH2PO4)。 3.1.7 吐温-20(C58H114O26)。 3.1.8 盐酸(HCl)。 3.2 试剂配制 3.2.1 提取液:乙腈-水(9+1)。 3.2.2 PBS清洗缓冲液:称取8.0g氯化钠、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾,用990mL 水将上述试剂溶解,用盐酸调节pH至7.0,用水定容至1L。 3.2.3 PBS/吐温-20缓冲液:称取8.0g氯化钠、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾,用 900mL水将上述试剂溶解,用盐酸调节pH至7.0,加入1mL吐温-20,用水定容至1L。 3.3 标准品 玉米赤霉烯酮(C18H22O5,CAS号:17924-92-4),纯度≥98.0%。或经国家认证并授予标准物质证GB5009.209—2016 3 书的标准物质。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 标准储备液:准确称取适量的标准品(精确至0.0001g),用乙腈溶解,配制成浓度为100μg/mL 的标准储备液,-18℃以下避光保存。 3.4.2 系列标准工作液:根据需要准确吸取适量标准储备液,用流动相稀释,配制成10ng/mL、50ng/ mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的系列标准工作液,4℃避光保存。 3.5 材料 3.5.1 玉米赤霉烯酮免疫亲和柱:柱规格1mL或3mL,柱容量≥1500ng,或等效柱。 3.5.2 玻璃纤维滤纸:直径11cm,孔径1.5μm,无荧光特性。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪:配有荧光检测器。 4.2 高速粉碎机:转速≥12000r/min。 4.3 均质器:转速≥12000r/min。 4.4 高速均质器:转速18000r/min~22000r/min。 4.5 氮吹仪。 4.6 空气压力泵。 4.7 玻璃注射器:10mL。 4.8 天平:感量0.0001g和0.01g。 5 分析步骤 5.1 提取 5.1.1 粮食和粮食制品 称取40.0g粉碎试样(精确到0.1g)于均质杯中,加入4g氯化钠和100mL提取液,以均质器 (4.3)高速搅拌提取2min,定量滤纸过滤。移取10.0mL滤液加入40mL水稀释混匀,经玻璃纤维滤 纸过滤至滤液澄清,滤液备用。 5.1.2 酱油、醋、酱及酱制品 称取25.0g(精确到0.1g)混匀的试样,用乙腈定容至100.0mL,超声提取2min,定量滤纸过滤。 移取10.0mL滤液并加入40mL水稀释混匀,经玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,滤液备用。 5.1.3 大豆、油菜籽、食用植物油 准确称取试样40.0g(准确到0.1g)(大豆需要磨细且粒度≤2mm)于均质杯中,加入4.0g氯化钠 和100mL提取液,以高速均质器(4.4)高速搅拌提取1min,定量滤纸过滤。移取10.0mL滤液并加入 40mL水稀释,经玻璃纤维滤纸过滤至滤液澄清,滤液备用。 5.1.4 酒类 取脱气酒类试样(含二氧化碳的酒类使用前先置于4℃冰箱冷藏30min,过滤或超声脱气)或其他