中华人民共和国国家标准 GB5009.231—2016 食品安全国家标准 水产品中挥发酚残留量的测定 2016-08-31发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会发布GB5009.231—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替SC/T3031—2006《水产品中挥发酚残留量的测定 分光光度法》。 本标准与SC/T3031—2006相比,主要变化如下: ———将处理方法中的搅拌改为恒温磁力搅拌; ———增加水蒸气蒸馏仪为处理方法中的提取装置。GB5009.231—2016 1 食品安全国家标准 水产品中挥发酚残留量的测定 1 范围 本标准规定了水产品中挥发酚残留量的分光光度测定方法。 本标准适用于水产品中可食部分挥发酚残留量的测定。 2 原理 用碱性溶液破坏样品组织结构,在酸性条件下用水蒸气蒸馏出挥发酚类化合物,在铁氰化钾存在 下,与4-氨基安替比林反应生成橙红色的安替比林染料,用三氯甲烷萃取,在460nm波长测定吸光度 定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水。 3.1 试剂 3.1.1 三氯甲烷(CHCl3)。 3.1.2 氨水(NH3·H2O)。 3.1.3 硫酸(H2SO4)。 3.1.4 氢氧化钠(NaOH)。 3.1.5 铁氰化钾(K3[Fe(CN)6])。 3.1.6 硫酸铜(CuSO4·5H2O)。 3.1.7 甲基橙(C14H15N3NaO3S)。 3.1.8 氯化铵(NH4Cl)。 3.1.9 4-氨基安替比林(C11H13N3O)。 3.1.10 活性炭粉末(粒径0.1mm~0.5mm)。 3.2 试剂配制 3.2.1 无酚水:取实验用水,每升水中加入0.2g经200℃烘干30min的活性炭粉末,充分振摇后,放置 过夜,用双层中速滤纸过滤后即可使用;或向实验用水中加氢氧化钠(NaOH)使水呈强碱性,并滴加高 锰酸钾溶液至紫红色,移入全玻璃蒸馏器中加热蒸馏,取馏出液备用。无酚水应贮于玻璃瓶中,取用时 应避免与硅胶制品(橡皮塞或乳胶管等)接触。 3.2.2 50%硫酸溶液:将浓硫酸在搅拌下缓缓加入等体积的实验用水中。 3.2.3 10%氢氧化钠溶液:称取10g氢氧化钠溶于水中,稀释至100mL,混匀。 3.2.4 8%铁氰化钾溶液:称取8g铁氰化钾(K3[Fe(CN)6])溶于水中,稀释至100mL,混匀,4℃冷 藏,可使用一周。GB5009.231—2016 2 3.2.5 10%硫酸铜溶液:称取10g硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶于水中,稀释至100mL,混匀。 3.2.6 0.05%甲基橙指示液:称取甲基橙0.05g溶于水中,稀释至100mL,混匀。 3.2.7 缓冲溶液:称取20g氯化铵(NH4Cl)溶于100mL氨水(NH3·H2O)中,pH约10.7,4℃冷藏。 3.2.8 2%4-氨基安替比林溶液:称取2g4-氨基安替比林(C11H13N3O)溶于水中,稀释至100mL,4℃ 冷藏,可使用一周。 3.3 标准品 苯酚标准品(C6H6O),纯度≥99%。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 标准储备溶液:称取苯酚0.01g(精确至0.1mg)于50mL小烧杯中,加无酚水溶解,再转移到 100mL容量瓶中,定容,混匀,于4℃保存,苯酚质量浓度为100μg/mL,有效期为7d。 3.4.2 标准工作液:取适量苯酚标准溶液,用无酚水稀释至每毫升含1.00μg苯酚,配制后要在2h内 使用。 4 仪器和设备 4.1 水蒸气蒸馏仪或500mL玻璃水蒸气蒸馏装置(见附录A)。 4.2 天平:感量为0.1mg和0.01g。 4.3 500mL(梨形)分液漏斗。 4.4 磁力搅拌器。 4.5 分光光度计。 4.6 调温电炉或调温电加热套。 4.7 组织捣碎机。 5 分析步骤 5.1 试样制备及保存 水产品取可食部分用组织捣碎机匀浆后,搅拌均匀,分装,密闭冷藏或冷冻保存。 5.2 试样处理 5.2.1 蒸馏提取 称取预处理的样品10g~20g(精确到0.01g,同时做空白试验)放烧杯中,加入氢氧化钠溶液 75mL,用磁力搅拌器搅拌10min。再加3~5滴甲基橙溶液,用硫酸溶液调节pH≤4(溶液呈橙红 色),再加硫酸铜溶液5mL,混匀后,置于水蒸气蒸馏仪提取瓶或500mL蒸馏瓶中,用少量无酚水洗净 烧杯,洗涤液并入水蒸气蒸馏仪提取瓶或蒸馏瓶中并加数粒玻璃珠。 使用玻璃水蒸气蒸馏装置(或水蒸气蒸馏仪)进行蒸馏,应连接好水蒸气蒸馏装置,确保严密不漏 气,取250mL锥形瓶接收馏出液,中速蒸馏60min~90min,至馏出液约240mL时,停止蒸馏,并用 10mL无酚水冲洗冷凝管,洗涤液并入馏出液中(蒸馏过程中保持酸性)。蒸馏液应尽量避免与橡胶制 品接触(橡皮塞、橡胶管和乳胶管里含有酚类化合物添加剂),如需使用时用硅胶管(塞)代替。 5.2.2 显色 将馏出液移入分液漏斗中,加2.0mL缓冲溶液,混匀。加1.5mL4-氨基安替比林溶液,混匀,再加