中华人民共和国国家标准 GB5009.256—2016 食品安全国家标准 食品中多种磷酸盐的测定 2016-08-31发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会发布GB5009.256—2016 1 食品安全国家标准 食品中多种磷酸盐的测定 1 范围 本标准规定了食品中多种磷酸盐的测定方法。 本标准适用于食品中磷酸盐、焦磷酸盐、六偏磷酸盐、三偏磷酸盐、三聚磷酸盐的测定。 2 原理 试样采用相应的方法提取和净化,以氢氧化钾溶液为淋洗液,阴离子交换柱分离,电导检测器检测。 以保留时间定性,外标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为优级纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 氢氧化钠(NaOH)。 3.1.2 氢氧化钾(KOH)。 3.1.3 甲醇(CH3OH),色谱纯。 3.2 试剂配制 3.2.1 氢氧化钠溶液(10mmol/L):称取0.4g氢氧化钠,溶于水并稀释定容至1000mL。 3.2.2 氢氧化钠溶液(50mmol/L):称取2.0g氢氧化钠,溶于水并稀释定容至1000mL。 3.3 标准品 3.3.1 磷酸钠(Na3PO4)标准溶液(1000mg/L,水基体)。 3.3.2 焦磷酸钠(Na4P2O7)标准溶液(1000mg/L,水基体)。 3.3.3 六偏磷酸钠[(NaPO3)6]标准溶液(1000mg/L,水基体)。 3.3.4 三偏磷酸钠[(NaPO3)3]标准品:纯度≥98%。 3.3.5 三聚磷酸钠(Na5P3O10)标准品:纯度≥98%。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 磷酸根标准中间(贮备)溶液(100mg/L):吸取磷酸钠标准溶液17.3mL于100mL容量瓶中, 用10mmol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度,此溶液每1L含磷酸根0.1g。 3.4.2 焦磷酸根标准贮备溶液(100mg/L):吸取焦磷酸钠标准溶液15.3mL于100mL容量瓶中,用 10mmol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度,此溶液每1L含焦磷酸根0.1g。 3.4.3 六偏磷酸根标准中间(贮备)溶液(100mg/L):吸取六偏磷酸钠标准溶液12.9mL于100mL容GB5009.256—2016 2 量瓶中,用10mmol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度,此溶液每1L含六偏磷酸根0.1g。 3.4.4 三偏磷酸根标准中间(贮备)溶液(1000mg/L):将三偏磷酸钠在103℃±2℃烘箱中干燥3h, 在干燥器中冷却至室温后,准确称取三偏磷酸钠标准品0.132g(精确至0.0001g),用10mmol/L氢氧 化钠溶液稀释至100mL,此溶液每1L含三偏磷酸根1.0g。 3.4.5 三聚磷酸根标准贮备溶液(1000mg/L):将三聚磷酸钠在103℃±2℃烘箱中干燥3h,在干燥 器中冷却至室温后,准确称取三聚磷酸钠标准品0.148g(精确至0.0001g),用10mmol/L氢氧化钠溶 液稀释至100mL,此溶液每1L含三聚磷酸根1.0g。 3.4.6 标准曲线工作溶液:吸取五种不同磷酸根标准贮备溶液,用10mmol/L氢氧化钠溶液稀释,制成 系列标准溶液,五种不同磷酸根的标准溶液浓度见表1。 表1 五种不同磷酸根的标准工作液浓度 单位为毫克每升 标准曲线系列 1 2 3 4 5 正磷酸根 0.00 0.300 1.00 5.00 10.0 焦磷酸根 0.00 0.300 1.00 5.00 10.0 三偏磷酸根 0.00 0.300 1.00 5.00 10.0 三聚磷酸根 0.00 0.300 1.00 5.00 10.0 六偏磷酸根 0.00 1.00 3.00 15.0 30.0 4 仪器和设备 4.1 离子色谱仪:包括电导检测器,配有抑制器,带梯度泵或淋洗液发生器,高容量阴离子交换柱,100μL 定量环。 4.2 食物粉碎机。 4.3 超声波清洗器:可进行80℃控温,60Hz。 4.4 天平:感量为0.1mg和1mg。 4.5 离心机:转速≥8000r/min,温度可调到4℃。 4.6 0.45μm水性滤膜(带针头过滤器)。 4.7 净化柱:包括OnGuardⅡRP柱、Ag柱和Na柱1),或等效柱。 1) 给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可,如果其他等效产品具有相同的效果,则 可使用这些等效的产品。4.8 注射器:1.0mL和5.0mL。 注:所有玻璃器皿使用前均需要依次用2mol/L氢氧化钾溶液和水分别浸泡4h,然后用水冲洗3次~5次,晾干 备用。 5 分析步骤 5.1 试样制备 5.1.1 鱼、肉类及其制品:取500g鱼、肉或其制品的可食部分,捣碎混匀。冷冻保存。 5.1.2 蔬菜、水果:取可食部分500g,洗净、晾干、切碎、混匀,用组织搅拌机制成匀浆备用。 5.1.3 奶粉、乳制品饮料或饮料类:通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀直到使样品均一化。GB5009.256—2016 3 5.1.4 固体油脂、脂肪等样品:取500g的样品研磨成均匀的泥浆状。为避免水分损失,研磨过程中应 避免产生过多的热量。 5.1.5 杂粮、小麦粉及其制品、果冻、巧克力、糖果、膨化食品、熟制坚果与籽类:取500g可食部分用食 物粉碎机搅匀备用。 5.1.6 调味料:粉末状调味料通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀;固体大颗粒状调味料取500g 用食物粉碎机搅匀备用。 5.1.7 谷类和淀粉类甜品、米粉、婴幼儿配方食品及辅助食品:通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混 匀直到使样品均一化。 注:在试样制备过程中,应防止样品受到污染。 5.2 样品前处理 5.2.1 样品的提取 5.2.1.1 蔬菜、水果、果冻、巧克力及糖果、杂粮、小麦粉及其制品、奶粉、乳制品饮料或饮料类:称取 2.5g(精确至0.001g,可适当调整试样的取样量)试样,用50mmol/L氢氧化钠溶液洗入50mL比色管 中混匀定容至刻度,80℃超声提取30min,每隔5min振摇一次,保持固定相完全分散。冷却至室温 后,溶液经滤纸过滤;取滤液于4℃下,8000r/min离心10min,取上清液备用。 5.2.1.2 膨化食品、熟制坚果与籽类、谷类和淀粉类甜品、米粉、婴幼儿配方食品及辅助食品:称取2.5g (精确至0.001g,可适当调整试样的取样量)试样,用50mmol/L氢氧化钠溶液洗入25mL比色管中混 匀定容至刻度,80℃超声提取30min,每隔5min振摇一次,保持固定相完全分散。冷却至室温后,溶 液经滤纸过滤;取滤液于4℃下,8000r/min离心10min,取上清液备用。 5.2.1.3 油脂、脂肪、调味料:称取1g(精确至0.001g,可适当调整试样的取样量)试样,用50mmol/L 氢氧化钠溶液洗入50mL比色管中混匀定容至刻度,80℃超声提取30min,每隔5min振摇一次,保持 固定相完全分散。冷却至室温后,溶液经滤纸过滤;取滤液于4℃下,8000r/min离心10min,取水相 清液备用。 5.2.1.4 鱼、肉类及其制品:称取2.5g(精确至0.001g,可适当调整试样的取样量)试样,用50mmol/L 氢氧化钠溶液洗入100mL比色管中混匀定容至刻度,80℃超声提取30min,每隔5min振摇一次,保 持固定相完全分散。冷却至室温后,溶液经滤纸过滤;取滤液于4℃下,8000r/min离心10min,取上 清液备用。 5.2.2 样品的净化 取5.2.1中处理完成后的上清液约15mL,通过0.45μm水性滤膜针头过滤器、OnGuardⅡRP,弃 去前面3mL(如果氯离子大于100mg/L,则需要依次通过针头过滤器、OnGuardⅡRP、Ag柱和 Na柱,弃去前7mL),收集后面洗脱液待测。测定前应根据样品含量对待测液进行适当稀释。 固相萃取柱使用前需进行活化,如使用OnGuardⅡRP柱(1.0mL)、OnGuardⅡAg柱(1.0mL) 和OnGuardⅡNa柱(1.0mL),其活化过程为:OnGuardⅡRP柱(1.0mL)使用前依次用10mL甲 醇、15mL水通过,静置活化30min。OnGuardⅡAg柱(1.0mL)和OnGuardⅡNa柱(1.0mL)用 10mL水通过,静置活化30min。 5.3 参考色谱条件 5.3.1 色谱柱:氢氧化物选择性,可兼容梯度洗脱的高容量阴离子交换柱,如DionexIonpacAS11-HC 4mm×250mm(带IonpacAG11-HC型保护柱4mm×50mm),或性能相当的离子色谱柱。 5.3.2 淋洗液:氢氧化钾溶液,梯度淋洗时间及氢氧化钾浓度见表2;流速1.0mL/min。