中华人民共和国国家标准 GB5009.261—2016 食品安全国家标准 贝类中神经性贝类毒素的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.261—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替SN/T1573—2013《出口贝类中神经性贝类毒素检验方法 小鼠生物法》。 本标准与SN/T1573—2013相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 贝类中神经性贝类毒素的测定”。GB5009.261—2016 1 食品安全国家标准 贝类中神经性贝类毒素的测定 1 范围 本标准规定了贝类中神经性贝类毒素(NSP)检测的小鼠生物测定方法。 本标准适用于贝类及制品中神经性贝类毒素(NSP)的检测。 2 原理 用乙醚提取贝类中神经性贝类毒素,提取物经减压蒸干后,再以1%吐温-60生理盐水为分散介质, 制备NSP-1%吐温-60生理盐水混悬液,将该混悬液注射入腹腔,观察小鼠存活情况,计算其毒力。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 盐酸(HCl)。 3.1.2 无水乙醚(C4H10O)。 3.1.3 吐温-60(C64H126O26)。 3.1.4 氯化钠(NaCl)。 3.1.5 次氯酸钠(NaClO)。 3.2 试剂配制 3.2.1 氯化钠溶液(0.85%):称取0.85gNaCl,加水溶解并定容至100mL。 3.2.2 1%吐温-60:称取1.0g吐温-60,用0.85%氯化钠溶液溶解并定容至100mL。 3.2.3 次氯酸钠溶液(5%):称取次氯酸钠50g,用水溶解,并稀释至1000mL。 3.3 标准品 短裸甲藻毒素标准品(brevetoxin-2),纯度≥90%。 3.4 材料 小白鼠:体重为19g~21g的健康ICR品系雄性小鼠。 4 仪器和设备 4.1 旋转蒸发器。 4.2 均质器。GB5009.261—2016 2 4.3 天平:感量为0.1g。 4.4 分液漏斗。 4.5 圆底烧瓶。 4.6 布氏漏斗。 4.7 一次性注射器:1mL。 4.8 离心机:转速≥6000r/min。 4.9 金属筛网:孔径约2mm。 5 分析步骤 注:橡胶手套、玻璃制品等用过的器材,以及废弃的提取液应在次氯酸钠溶液(5%)中浸泡1h以上,以使毒素分解。 5.1 试样制备 5.1.1 样品采集 每个分析样品至少要取10个以上贝类,并使贝肉达200g以上。 冷冻样品置于保温盒中冷冻送检,或保证其处于低温状态(0℃~10℃)送检。如为带壳样品,应 开壳去除水分后冷冻送检。 5.1.2 试样制备 5.1.2.1 生鲜带壳样品 用清水将贝壳外表彻底洗净,切断闭壳肌,开壳,用水淋洗内部去除泥沙及其他外来物。将闭壳肌 和连接在胶合部的组织分开,取出贝肉,切勿割破肉体。开壳前不要加热或用麻醉剂。收集200g贝肉 放在孔径约2mm的金属筛网上沥水5min,捡出碎壳等杂物,将贝肉均质,备用。 5.1.2.2 冷冻样品 在室温下,使冷冻样品呈半冷冻状态。带壳冷冻样品,按5.1.2.1方法清洗、开壳、淋洗取肉,除去贝 肉外部附着的冰片,抹去水分后,室温缓化。收集200g贝肉放在孔径约2mm的金属筛网上沥水5min, 将贝肉均质,备用。 5.1.2.3 贝类罐头 将罐头内容物沥干水分,倒入均质器充分均质,备用。 5.1.2.4 贝肉干制品 称取100g干制品放入足量清水中浸泡24h~48h(4℃冷藏),沥干、均质、备用。 5.1.2.5 盐渍品 用清水洗涤,流水脱盐,沥干,均质、备用。 5.2 试样提取 取100g试样到500mL烧杯中,加入5g氯化钠和1mL浓盐酸。搅拌均匀。边搅拌边加热混合 物至沸腾,文火煮5min,冷却至室温。 将混合物移至500mL离心管中,用50mL乙醚冲洗烧杯,将冲洗液一同移到离心管中。向离心管