1 SB 团体标准 T/CTMA 007—2020 茶叶中氯噻啉残留量 的测定 液相色谱 -质谱/质谱法 Determination of Imidaclothiz Residue in Tea Liquid Chr omatography -Tandem Mass Spectrometry 2020 -01-20发布 2020 -02-01实施 中国茶叶流通协会 发 布 全国团体标准信息平台 2 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中国茶叶流通协会提 出并归口。 本标准起草单位： 北京市茶叶质量监督检验站、中国茶叶流通协会、中国计量科学研究 院、北京市理化分析测试中心 、北京食品科学研究院 。 本标准主要起草人： 刘松南、 王庆、汤桦、赵新颖、董晓倩、 王华、申卫伟、 于英杰、 宗琦、赵金红、 王尉、吴雪。 全国团体标准信息平台 3 茶叶中氯噻啉残留量 的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本标准规定了茶叶中氯噻啉残留量的液相色谱 -质谱 /质谱测定方法。 本标准适用于茶叶中氯噻啉残留量的测定。 2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日 期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用 于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规则和试验方法 GB/T 8302 茶 取样 GB/T 8303 茶 磨碎试样的制备及其干物质含量测定 3 原理 试样中的氯噻啉经乙腈振荡提取，提取液经 分散固相萃取 法净化，利用吸附剂与基质 中的杂质相互作用，吸附杂质从而达到净化的目的。净化液经液相色谱串联质谱检测， 标 准曲线外标法定量。 4 试剂和材料 除另有说明，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 乙腈（CH 3CN，CAS号： 75-05-08）：色谱纯。 4.1.2 甲酸（CH 3COOH，CAS号： 64-18-6）：色谱纯。 4.1.3 氯化钠（NaCl，CAS号： 7647 -14-5）。 4.1.4 无水硫酸镁 （MgSO 4，CAS号： 7487 -88-9）。 全国团体标准信息平台 4 4.2 试剂配制 4.2.1 甲酸溶液（ 0.1+99.9）：吸取 0.5 mL甲酸加入到 499.5 mL水中，混匀。 4.2.2 乙腈溶液 （50+50）：量取 100 mL乙腈加入到 100 mL水中，混匀。 4.3 标准品 氯噻啉标准物质： （C7H8ClN 5O2S，CAS 号： 105843 -36-5），纯度 ≥98%固体，或使用 有证溶液标准物质 。 4.4 标准溶液配制 4.4.1 标准储备液 （100 μg/mL ）：准确称取 10 mg（准确到 0.1 mg）氯噻啉标准品于 100 mL 容量瓶中，用乙腈溶解并定容 。置于 4 ℃冷藏避光保存，有效期 6个月。 4.4.2 标准工作溶液（10.0 μg/mL ）：准确移取1.00 mL氯噻啉标准 储备溶液 于10 mL容量 瓶中，用乙腈 溶液（ 4.2.2）定容。置于 4 ℃冷藏避光保存，有效期 1个月。 4.5 材料 4.5.1 乙二胺 -N-丙基硅烷化 硅胶（PSA）：40~60 μm。 4.5.2 十八烷基硅 烷键合硅胶（C18）：50 μm，60 Å。 4.5.3 石墨化炭黑 （GCB）：120~400目。 4.5.4 微孔滤膜： 0.22 μm，有机相。 4.5.5 离心管： 2 mL，10 mL具塞塑料离心管。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱串联质谱仪 ，配有电喷雾离子源 （ESI）。 5.2 分析天平：感量 0.1 mg。 5.3 离心机：配有 2 mL、10 mL转头，不低于 5000 r/min。 5.4 涡旋振荡器。 6 取样和试样制备 全国团体标准信息平台 5 按GB/T 8302 方法取有代表性的茶叶样品， 按GB/T 8303方法粉碎，装袋避光保存。 7 前处理方法 7.1 提取 称取 1 g样品（精确到 0.001g）于 10 mL离心管中，加入 0.5 g氯化钠、 0.2 g无水硫酸 镁、 5.00 mL乙腈，漩涡振荡提取 1 min，静置浸泡 提取 10 min后再次涡旋振荡提取 1 min， 于5000 r/min 离心 3分钟，取上清液 1.00 mL，待净化。 7.2 净化 吸取 1.00 mL提取液于 装有 GCB 50 mg、PSA 50 mg 、C18 50 mg、无水硫酸镁 150 mg 的2 mL离心管中 。漩涡振荡 1 min，5000 r/min 离心 3 min，取上清液 0.50 mL于2 mL离心 管中，加入 0.50 mL水，摇匀，经微孔滤膜 （4.5.4）过滤后供 上机测定。 8 测定 8.1 液相色谱参考定条件 a) 色谱柱： C18，100 mm× 2.1 mm× 1. 7 μm，或者相当； b) 柱温： 40 ℃； c) 进样量： 10 μL； d) 流动相及梯度洗脱条件，见表 1。 表1 流动相及梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /(μL/min) 流动相 A （甲酸溶液（ 4.2.1））/% 流动相 B （乙腈） /% 0.0 300 99 1 1.0 99 1 5.0 5 95 8.5 5 95 9.0 99 1 10.0 99 1 8.2 质谱参考 条件 a) 离源源：电喷雾 离子源（ ESI），正模式 ； b) 扫描方式 ：选择反应监测 （SRM）或多反应监测（ MRM）； c) 其它参考质谱条件见附录 A。 8.3 标准工作曲线 全国团体标准信息平台 6 精确吸取一定量的 氯噻啉标准工作溶液（4.4.2），逐级用乙腈 溶液（4.2.2）释成质量浓 度为 0.005 μg/mL 、0.01 μg/mL 、0.05 μg/mL 、0.1 μg/mL 和0.5 μg/mL 的标准系列工作溶液。 空白样品 经7.1提取、 7.2净化 5000 r/min 离心后，取0.50 mL 乙腈净化液 氮吹至干，分别 加入 1.00 mL上述标准 系列工作溶液复溶， 过微孔滤膜（ 4.5.4）配制成系列基质标准工作溶 液， 供上机测定。 以氯噻啉定量离子 的峰面积为纵坐标， 标准溶液 对应的质量浓度为横坐标， 绘制标准曲线。 8.4定性测定 在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品一致，并 且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比符合表 2 要求，则可判断样品中存在氯噻啉。 表2 定性时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 / % ＞ 50 ＞ 20 ~50 ＞ 10 ~20 ≤ 10 允许相对偏差 / % ± 20 ± 25 ± 30 ± 50 8.5定量测定 本方法采用 基质外标校准 曲线法定量测定，确定试样溶液中氯噻啉的浓度。 在本标准色 谱-质谱条件下，氯噻啉 的保留时间约为 4.7 min，实际样品中氯噻啉色谱图见附录 B.1。 8.6空白实验 除不称取试样外，均按上述步骤 进行操作 ，应确认不含有干扰待测组分的物质。 9 结果计算 计算结果按式（ 1）计算： · · · · · · · · · · · · （1） 式中： X——试样中氯噻啉的残留量， mg/kg； c——由标准曲线得出的测定液中氯噻啉浓度， μg/mL； V——样品最终定容体积， mL； m——试样取样量， g。 测定结果保留两位有效数字，以 重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均 全国团体标准信息平台 7 值表示。 10 精密度 10.1 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分 率） ，应符合附录 C的要求。 10.2 在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分 率） ，应符合附录 D的要求。 11 定量限和回收率 11.1定量限 本方的定量限为 0.01 mg/kg。 11.2回收率 当添加水平为 0.0100 mg /kg、0.300 mg /kg、3.00 mg /kg时，氯噻啉在不同基质中的添加 回收率在72.7%~106.0 %之间，详 见附录 E。 全国团体标准信息平台 8 附录 A （资料性附录） 参考质谱条件 参考质谱条件： a. 喷雾电压： 4000 V b. 气化温度： 300 ℃ c. 鞘气压： 45 Arb d. 辅助器压： 15 Arb e. 离子传输管温度： 320 ℃ f. 碰撞气体：氩气 1.5 mTorr g. 检测离子对