ICS 71.100.70 Y 42 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 30931—2014 化妆品中苯扎氯铵含量的测定 高效液相色谱法 Determination of benzalkonium chloride in cosmetics- High performance liquid chromatography 2014-07-08发布 2014-11-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 30931—2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口。 本标准起草单位：国家化妆品质量监督检验中心（北京）、北京市海淀区产品质量监督检验所、上海 市日用化学工业研究所。 本标准主要起草人：刘艳琴、王浩、史海良、杨红梅、郭启雷、潘红艳、李琼、武晓剑、沈敏、钱茵， GB/T30931—2014 化妆品中苯扎氯铵含量的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了化妆品中苯扎氯铵的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于膏霜、香波、水剂类等化妆品中苯扎氯铵的测定。 本标准方法检出限为30mg/kg，定量限为100mg/kg。 规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 管阵列检测器对其进行准确分析，外标法定量，液相色谱-质谱确证。 4试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 甲醇：色谱纯。 4.2 甲酸：色谱纯。 4.3 乙腈：色谱纯。 4.4 乙酸铵。 4.5 三乙胺。 4.6 氯化钠。 4.7 冰醋酸。 4.850%甲醇水溶液：量取500mL甲醇（4.1）与500mL水混合。 4.90.5%甲酸的甲醇溶液：移取5mL甲酸（4.2)至1000mL容量瓶中，甲醇（4.1)定容。 4.10标准样品：苯扎氯铵（n-C12H25-C,HiaNCl、n-CH2-C,H1:NCl、n-C1Haa-C,H1sNCI)标准样品纯 度不小于99%。苯扎氯胺标准样品信息参见附录A。 4.11标准溶液 4.11.13种苯扎氯铵（n-C12H25-CH13NCl、n-C14H29-CgH13NC1、n-C16H33-CgH13NCI)标准储备液：各 称取0.5g(精确至0.0001g）n-C12H25-C,H/3NCl、n-CuH29-C,Hi3NCl、n-C1Ha3-C,H13NCI标准样品 （4.10），分别置于100mL容量瓶中，用50%甲醇水溶液（4.8）溶解定容。 4.11.2苯扎氯铵（n-C12H25-CgHt:NCl、n-CuH2g-C.HisNCl、n-ClH3a-CgHi3NCI)混合标准工作溶液： 1 GB/T30931—2014 分别准确吸取3种标准储备溶液（4.11.1)0.0mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、5.0mL、10.0mL置于 50mL容量瓶中，用含0.5%甲酸的甲醇溶液（4.9）定容，得到浓度分别为0.00mg/mL、0.01mg/mL、 0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.50mg/mL、1.00mg/mL的混合标准工作溶液。 4.12乙酸铵溶液：称取3.08g乙酸铵（4.4）置于烧杯中，加水溶解并定容至1000mL，加1mL三乙胺 （4.5），用冰醋酸（4.7）调节至pH=4.0，过0.45um滤膜（4.13），待用。 4.13滤膜：0.45μm，有机相。 5仪器与设备 5.17 高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器 5.2 串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.3 分析天平：感量分别为0.0001g和0.001g。 超声波清洗器。 5.5 旋转蒸发仪。 5.6 具塞比色管：10mL和25mL。 6 分析步骤 6.1 样品制备 6.1.1膏霜、香波类样品 称取0.5g样品，精确至0.001g，置于25mL比色管中，用含0.5%甲酸的甲醇溶液（4.9）定容。超 液（4.9）溶解，过0.45μm滤膜（4.13），滤液供液相色谱仪分析。 6.1.2水剂类样品 称取1.0g样品，精确至0.001g，置于10mL比色管中，用含0.5%甲酸的甲醇溶液（4.9）定容至刻 度，超声波提取10min，经滤纸过滤，过0.45μm滤膜（4.13），滤液供液相色谱仪分析。 6.2测定 6.2.1 液相色谱条件 液相色谱测定参考条件如下： 色谱柱：SCX色谱柱5μm，250mmX4.6mm(i.d.），或性能相当者； a） b) 柱温：25℃； c) 检测波长：260nm； d)i 进样量：20μL； e） 流动相： 溶剂A：乙腈（4.3），溶剂B：乙酸铵溶液（4.12）。液相色谱梯度洗脱条件见表1。 2 GB/T30931—2014 表1液相色谱梯度洗脱条件 时间/min 乙腈/% 乙酸铵溶液/% 0 100 15 80 20 22 80 20 22.1 100 0 6.2.2 标准工作曲线绘制 分别移取20μL浓度为0.00mg/mL、0.01mg/mL、0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.50mg/mL、 1.00mg/mL的混合标准工作溶液（4.11.2），按液相色谱条件（6.2.1)进行测定，以色谱峰的峰面积为纵 坐标，对应的溶液浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线。3种苯扎氯铵同系物标准样品色谱图参见 附录 B的图 B.1。 6.2.3定量分析 按液相色谱条件（6.2.1)对待测样液进行测定，外标法定量。待测样液中被测物的响应值应在标准 工作曲线的线性范围之内。含量高的样品可取适量样品溶液用含0.5%甲酸的甲醇溶液（4.9）稀释后进 行测定。 6.3空白试验 除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。 7结果计算 7.1样品中3种苯扎氯铵含量的计算 样品中3种苯扎氯铵含量按式（1)计算： (1) m 式中： 样品中每种苯扎氯铵的含量（即Xc12Xc1.Xc1s），单位为毫克每千克（mg/kg）； 样品测定液中每种苯扎氯铵的浓度，单位为微克每毫升（ug/ml）； Ct V 样品定容体积，单位为毫升（mL）； k 乘积因子，对于水剂类化妆品，k=1；对于膏霜、香波类化妆品，k=0.2； 样品的质量，单位为克（g）。 u 计算结果应扣除空白值，计算结果保留至小数点后两位。 7.2 样品中3种苯扎氯铵总量的计算 样品中3种苯扎氯铵总量按式（2）计算： X - Xc12 + Xci4 +Xc16 .(2 ) 式中： 样品中3种苯扎氯铵的总含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； X 3